Purification of recombinant GFP produced by Agrobacterum-mediated transient expression in Nicotiana excelsior

Abstract

Green fluorescent protein (GFP) is commonly used as a reporter protein in a wide range of biological experiments. The efficient protocol of Agrobacterium mediated transient expression in Nicotiana excelsior was applied for quick preparative production of recombinant GFP. The protein purification scheme has been developed and included ammonium sulfate precipitation and Q sepharose anion exchange chromatography. It results in obtaining of a fraction with about 85 % GFP homogeneity and the protein yield of about 75 %.

Зелений флуоресцентний білок (GFP) часто використовують як репортерний білок у різних галузях біологічних досліджень. Ефективний протокол Agrobacterium-опосередкованої транзієнтної експресії в Nicotiana excelsior було використано для швидкого одержання препаративної кількості рекомбінантного GFP. Розроблено схему очищення рекомбінантного білка, яка включає стадію осадження сульфатом амонію та іонообмінну хроматографію на сорбенті Q-sepharose. В результаті очищення було отримано фракцію білків з вмістом GFP близько 85 %. В ході очищення було отримано близько 75 % від початкової кількості рекомбінантного GFP.

Зеленый флюоресцентный белок (GFP) часто используется в качестве маркерного белка в разных областях биологических исследований. Эффективный протокол Agrobacterium-опосредованной транзиентной экспрессии в Nicotiana excelsior был использован для быстрого получения препаративных количеств рекомбинантного GFP. Разработана схема очистки рекомбинантного белка, включающая стадию осаждения сульфатом аммония и ионообменную хроматографию на сорбенте Q-sepharose. В результате очистки была получена фракция белков с содержанием GFP около 85 %. В ходе очистки было выделено около 75 % от начального количества рекомбинантного GFP.