Эффективная агробактериальная трансформация растений цикория (Cichorium intybus L.) вектором с геном туберкулезного антигена ЕSAT6

Abstract

Определены условия трансформации цикория Cichorium intybus L. геном антигена ESAT6 из Mycobacterium tuberculosis, которые обеспечивают наибольшую частоту регенерации зеленых растений с трансформированной ДНК. При культивировании семядолей в течение 3 сут без цефотаксима и затем 1 сут без канамицина частота трансформации составляла 86 %. По результатам ПЦР-анализа все растения имели как селективный ген nptII, так и ген esxA туберкулезного антигена ESAT6. В то же время анализ обратных транскриптов показал, что хотя ген nptII транскрибировался у всех восьми анализированных растений, обратные транскрипты целевого гена esxA обнаружены только у пяти.

The conditions of high efficient chicory transformation with Mycobacterium tuberculosis antigene ЕSAT6 have been determined. Transformation frequency was up to 86 % when the cotyledons were cultivated within 3 days without cefotaxime and then 1 day without kanamycine. DNA PCR-analysis has shown the presence both of selective nptII and target esxA genes in all analysed plants. At the same time RT-PCR has shown the presence of nptII transcripts for eight analysed lines and esxA transcripts for only five analysed lines.

Визначено умови трансформації цикорію Cichorium intybus L. геном антигена ESAT6 Mycobacterium tuberculosis, що забезпечують найбільшу частоту регенерації зелених рослин із трансформованою ДНК. При культивуванні сім’ядоль протягом 3 діб без цефотаксиму та потім одну добу без канаміцину частота трансформації становила 86 %. За результатами ПЛР-аналізу рослини мали як селективний ген nptII, так і ген esxА туберкульозного антигена ESAT6. У той же час аналіз зворотних транскриптів показав, що хоча ген nptII транскрибувався у всіх восьми аналізованих рослин, зворотні транскрипти цільового гена esxА виявлені тільки у п’яти рослин.