Identification of phosphate transporter NaPi2b as MX35 cancer antigen by modified SEREX approach

Abstract

In this study we describe the identification of sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b as MX35 cancer-associated antigen. To achieve this goal we have screened extensively a cDNA expressing library from ovarian cancer cell line OVCAR3 with monoclonal antibody MX35. To further confirm the authenticity of this finding, we showed that bacterially and baculovirally expressed NaPi2b is specifically recognized by MX35 antibody. Moreover, the validity of these results was verified in a parallel study involving affinity purification and mass spectrometry. The epitope for MX35 monoclonal antibody was mapped to the largest extracellular loop of NaPi2b. Taken together, this study uncovers the identity of MX35 antigen and provides molecular tools for studying its function in normal and cancer tissues.

Натрій-залежний транспортер NaPi2b ідентифіковано як MX35 пухлинний антиген. Для цього здійснено скринування кДНК-експресуючої біблеотеки, отриманої з клітин OVCAR3, моноклональними антитілами MX35. Щоб підтвердити ці дослідження, встановлено, що NaPi2b, експресований в бактеріях та клітинах комах, специфічно розпізнається MX35 антитілами. Крім того, виявлено ділянку, яка містить епітоп для моноклональних антитіл на великому позаклітинному домені NaPi2b. Таким чином, нами визначено антиген MX35, що забезпечує молекулярну основу для подальшого вивчення його функції в нормальних тканинах та при раку.

Натрий-зависимый транспортер NaPi2b идентифицирован как MX35 опухлевый антиген. Для достижения этого осуществлено скринирование кДНК-экспрессирующей библиотеки, полученной из OVCAR3 клеток, моноклональными антителами. Чтобы подтвердить эти результаты, установлено, что NaPi2b, экспрессированный в бактериях и в клетках насекомых, специфично узнается антителами MX35. Определен участок на внеклеточном домене NaPi2b, содержащий эпитоп для антител. Таким образом, нами идентифицирован антиген MX35, что создает молекулярную основу для дальнейшего изучения его функции в нормальных и раковых тканях.