Клонирование и экспрессия гена SPAА Еrysipelothrix rhusiopathiae в Еscherichia coli

Abstract

Цель. Клонировать ген SPAА – поверхностный антиген Er. rhusiopathiae – в плазмидный вектор и экспрессировать белок SpaА в E. coli. Методы. Расчет и синтез олигонуклеотидных праймеров, полиме - разная цепная реакция, клонирование, экспрессия рекомбинантных белков в E. coli, электрофорез в агарозе и полиакриламидном геле. Результаты. Полноразмерный и усеченный ген SPAА Er. rhusiopathiae клонирован в экспрессирующую плазмиду рЕТ24а(+). Экспрессия полного гена не сопровождается наработкой значительного количества рекомбинантного белка, предположительно, вследствие его токсичности для клеток E. coli. Элиминация из полноразмерного гена фрагмента, кодирующего насыщенную пролином область, и домена тандемных повторов, а также получение усеченного варианта гена приводят к устойчивому синтезу рекомбинантного продукта с ожидаемой молекулярной массой. Выводы. Получена рекомбинантная плазмида, содержащая фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, что позволяет выделять в препаративних количествах в E. coli рекомбинантный белок с м. м. 47 кДа. Ключевые слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбинантный белок.

Aim. Cloning of Er. rhusiopathiae surface antigen – SPAА gene into plasmid vector and its expression in E. coli. Methods. Oligonucleotide primers design and synthesis, polymerase chain reaction, cloning, recombinant proteins expression in E. coli, electrophoresis in agarose, PAGE. Results. The full-size and truncated Er. rhusiopathiae SPAА genes were cloned into expression plasmid рЕТ24а(+). The expression of full-size gene didn't result in significant recombinant protein production, presumably due to its toxicity for E. coli cells. The elimination of fragment coding for proline-rich region and tandem repeats domain from full-size gene led to production truncated variant of recombinant protein with expected molecular mass. Conclusions. The recombinant plasmid containing fragment of Er. rhusiopathiae SPAА gene was constructed. It allows obtaining preparative amount recombinant protein with m. m. 47 kDa in E. coli. Keywords: Erysipelothrix rhusiopathiae, SPAА gene, recombinant protein.

Мета. Клонувати ген SPAА – поверхневий антиген Er. rhusiopathiae – у плазмідний вектор та експресувати білок SpaА в E. coli. Методи. Розрахунок і синтез олігонуклеотидних праймерів, полімеразна ланцюгова реакція, клонування, експресія рекомбінантних білків у Е.coli, електрофорез в агарозі та поліакриламідному гелі. Результати. Повнорозмірний і усічений ген SPAА Er. rhusiopathiae клоновано в експресуючу плазміду рЕТ24а(+). Експресія повного гена не супроводжується синтезом значної кількості рекомбінантного білка, очевидно, внаслідок його токсичності для клітин E. coli. Елімінація з повнорозмірного гена фрагмента, що кодує насичену проліном ділянку, і домену тандемних повторів, а також одержання усіченого варіанта гена призводять до стабільного синтезу рекомбінантного продукту з очікуваною молекулярною масою. Висновки. Отримано рекомбінантну плазміду, яка містить фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, що дозволяє виділяти у препаративних кількостях в E. coli рекомбінантний білок з м. м. 47 кДа. Ключові слова: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбінантний білок