Связывание алкилирующих производных олигонуклеотидов клетками в присутствии добавок, стимулирующих процесс трансфекции

Abstract

Изучено влияние ряда добавок, применяемых для улучшения трансфекции эукариотических клеток нуклеиновыми кислотами, на связывание клетками фибробластов мыши L-929 и асцитной карциномы Кребс-2 [4-N-2-хлорэтил)-N-метиламинобензил]-5' - [³²P] фосфамидов олигонуклеотидов разного состава и длины. Показано, что диметилсульфоксид, ДЭАЭ-декстран и полилизин неэффективны или малоэффективны для увеличения степени связывания. Заметный эффект оказывало соосаждение олигонуклеотидных производных на клетках хлористым кальцием из фосфатного буфера: связывание производных клетками возрастало как минимум на порядок, а уровень специфической модификации нуклеиновых кислот внутри клетки – в шесть раз.

Вивчено вплив ряду добавок, які застосовано для поліпшення трансфекції еукаріотичних клітин нуклеїновими кислотами, на зв’язування клітинами фібробластів миші L-929 і асцитної карциноми Кребс-2 [ 4-N-2-хлоретил)-N-метиламінобензил ]-5 '-[³²P ]фосфаміду олігонуклеотидів різного складу і довжини. Показано, що диметилсульфоксид, ДЕАЕ-декстран і полілізин неефективні або малоефективні для збільшення ступеня зв’язування. Помітний ефект чинило соосаждення олігонуклеотидних похідних на клітинах хлористим кальцієм з фосфатного буфера : зв’язування похідних клітинами зростало як мінімум на порядок, а рівень специфічної модифікації нуклеїнових кислот всередині клітини – у шість разів.

The effect of components facilitating transfection on the uptake of the alkylating 4-(N-2-chloroethyl-N-methylamino) -benzyl 5'-[³²P]phosphamides of oligodeoxyribonucleotides of various length and structure by the L-929 mouse fibroblasts and Krebs-2 ascite carcinoma cells was investigated. Dimethylsulfoxide, DEAE-dextran and polylysine had a little or no effect on the uptake. Substantial effect has been observed when oligonucleotide derivatives were coprecipitated with the cells by calcium chloride from the phosphate buffer. Uptake of the derivatives by cells increased at least by one order of magnitude and the level of nucleic acids specific modification within the cells —by factor of 6.