Белковый блотинг

Abstract

Метод белкового блотинга активно используется в молекулярно-биологических исследованиях для анализа взаимодействий типа белок – ДНК и белок – белок, включая определение специфичности антигенов и антител. Рассмотрены различные этапы блотинга – перенос белков на мембраны, обработка блотов, создание иммунных комплексов на репликах и окрашивание блотов. Представлены два примера применения иммуноблотинга для анализа специфичности антител к интерферонам человека.

Метод білкового блотингу активно використовується в молекулярно-біологічних дослідженнях для аналізу взаємодій типу білок–ДНК і білок–білок, включаючи визначення специфічності антигенів і антитіл. Розглянуто різні етапи блотингу – перенесення білків на мембрани, обробка блотів, створення імунних комплексів на репліках і фарбування блотів. Представлено два приклади застосування імуноблотингу для аналізу специфічності антитіл до інтерферонів людини.

The detailed procedure of protein blotting is described in the following order: protein transfer onto the replica, blocking of the non-specific interactions, the interaction of the immobilized antigen with the 1st and 2nd antibodies, the visualization of immune complexes on the blot. Two practical applications of immunoblotting are considered when analyzing anti-oca-interferon monAbs' specificity and investigating (5-interferon expression in human HeLa cells.