Focal adhesion kinase (FAK1) regulates SHB phosphorylation and its binding with a range of signaling proteins

Abstract

Aim. To investigate an effect of the Focal adhesion kinase 1 (FAK1) expression on the level of tyrosine phosphorylation of an adaptor protein SHB and to find functional consequences of this posttranslational modification. Methods. Recombinant DNA construction, protein expression and purification, human cell transfection, western blot. Results. The expression of FAK1 induces the massive tyrosine phosphorylation of SHB adaptor and enhances its interaction in vitro with SH2 domains of a range of the signaling proteins such as PI3K, ABL, CRK and PLCG1. Additionally we have found that Epstein-Barr virus protein LMP2A can partially mimic the FAK1-mediated effect strongly elevating the efficiency and SHB interaction with the mentioned above proteins. While the expression of individual proteins elevated SHB phosphorylation level, the co-expression of LMP2A and FAK1 did not display a synergetic effect. Conclusions. FAK1 as well as LMP2A induce the SHB tyrosine phosphorylation and enhance its interaction with a set of the signaling proteins.

Мета. Дослідити ефект надексперсії кінази фокальної адгезії (FAK1) на рівнь фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та знайти функціональне значення цієї посттрансляційної модифікації. Методи. Конструювання рекомбінантних ДНК, експресія та очистка рекомбінантних білків, трасфекція клітинних ліній, вестерн блот. Результати. Надексперсія FAK1 в клітинах лінії 293 викликає масивне фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та значно підсилює його взаємодію in vitro з SH2-доменами низки сигнальних білків, таких як PI3K, ABL, CRK та PLCg1. Крім того, білок LMP2A вірусу Епштейна-Барр може посилювати in vitro зв’язування SHB з вищезазначеними білками, так само, як і FAK1. Тоді як надекспресія окремих білків FAK1 та LMP2A підвищувала рівні фосфорилювання SHB, їх ко-експерсія не мала синергічного ефекту. Висновки. Експресія FAK1 та LMP2A індукує фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та підсилює його взаємодію з SH2-доменами низки сигнальних білків.

Цель. Исследовать эффект суперэкспрессии киназы фокальной адгезии (FAK1) на уровень фосфорилирования остатков тирозина адаптерного белка SHB и найти функциональное значение этой посттрансляционной модификации. Методы. Конструирование рекомбинантных ДНК, экспрессия и очистка рекомбинантных белков, трансфекция клеточных линий, вестерн блот. Результаты. Суперэксперссия FAK1 в клетках линии 293 приводит к многократному повышению уровней фосфорилирования остатков тирозина адаптерного белка SHB, что в свою очередь приводит к усилению взаимодейсвия с SH2-доменами ряда сигнальных белков, таких как PI3K, ABL, CRK та PLCg1. Кроме того, белок LMP2A вируса Эпштейна-Барр может усиливать in vitro взаимодействие SHB с указанными белками, аналогично FAK1. Тогда как суперэкспрессия отдельных белков FAK1 та LMP2A приводила к интенсификации фосфорилирования SHB, их ко-экспрессия не обладала синергическим эффектом. Выводы. Экспрессия FAK1 и LMP2A индуцирует фософрилирование остатков тирозина адаптерного белка SHB и усиливает его взаимодействие с SH2-доменами ряда сигнальных белков.