Сайт-направленный мутагенез остатков лизина, локализованных в соединительном пептиде нуклеотидсвязывающего домена (свертки Россмана) тирозил-тРНК синтетазы из печени быка

Abstract

Методом сайт-направленного мутагенеза изучена функциональная роль аминокислотных остат­ ков лизина 146 и 147, локализованных в соединительном пептиде нуклеотидсвязывающего домена эукариотической тирозил-тРНК синтетазы. Обнаружено, что замена как обоих положительно заряженных остатков лизина на аспарагин и тирозин соответственно, так и одного остатка лизина-147 приводит к полной инактивации фермента в реакции аминоацилирования гомологичной тРНКТуг быка. Сделано предположение о возможной роли данного остатка лизина в стабилизации переходного состояния при взаимодействии синтетазы с акцепторным стеблем гомологичной тРНКTyr .

Методом сайт-спрямованого мутагенезу вивчено функціо­нальну роль амінокислотних залишків лізину-146 та 147, локалізованих у з'єднувальному пептиді нуклеотидзв'язуючого домену (згортки Россмана) еукаріотичної тирозил-тРНК син­тетази. Встановлено, що заміна як обох позитивно зарядже­них залишків лізину на аспарагін та тирозин відповідно, так і одного залишку лізину-147 призводить до повної інактиваиії синтетази в реакції аміноацилювання гомологічної тРНК. Зроблено висновок щодо можливої ролі даного залишку лізину в стабілізації перехідного стану при взаємодії синтетази з акцепторним стеблом гомологічної тРНКTyr

The functional role of lysine 146 and 147 residues located in the connection peptide of the nucleotide-binding domain (Rossman fold) of eukaryotic tyrosyl-tRNA synthetase has been studied by means of site-directed mutagenesis. Replacement of both positively charged residues with asparagine and tyrosine correspondingly as well as substitution of lysine 147 alone cause inactivating of tyrosyl-tRNA synthetase in the reaction of aminoacylation of homologous tRNA. The significance of lysine 147 in stabilization of complex between synthetase and tRNA acceptor stem has been suggested.