Трансформация клеток дрожжей плазмидной ДНК с использованием хелатирующих агентов. О роли перекисного окисления липидов в индукции компетентности у дрожжей

Abstract

Обнаружено, что предварительная обработка клеток дрожжей Sacсharomices cerevisiae (штаммы 746 и LL-20) хелатирующими агентами переходных металлов (8-оксихинолин, 1,10-фенантролин) приводит к появлению у них компетентности к трансформации плазмидной ДНК. Изучены факторы, влияющие на эффективность трансформации дрожжей с использованием 8-оксихинолина и двурепликонной плазмиды RВ4. Выход трансформантов при использовании данного метода, как правило, достигал 4·10³– 2·10⁴ трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК. Показано, что хелаторы стимулируют перекисное окисление липидов у дрожжей. Присутствие ингибитора окисления липидов – синтетического антиоксиданта ионола в момент обработки клеток 8-оксихинолином – приводит к резкому снижению выхода трансформантов. Полученные данные свидетельствуют о том, что действие хелаторов на способность дрожжей к трансформации опосредовано их влиянием на перекисное окисление мембранных липидов.

Виявлено, що попередня обробка клітин дріжджів Sacсharomices cerevisiae (штами 746 і LL-20) хелатуючими агентами перехідних металів (8-оксихінолін, 1,10-фенантролін) призводить до появи у них компетентності до трансформації плазмідної ДНК. Вивчено фактори, що впливають на ефективність трансформації дріжджів з використанням 8-оксихіноліну та дворепліконної плазміди RВ4. Вихід трансформантів при використанні даного методу, як правило, досягав 4 ·10³–2 ·10⁴ трансформантів на 10 мкг плазмідної ДНК. Показано, що хелатори стимулюють перекисне окиснення ліпідів у дріжджів. Присутність інгібітора окиснення ліпідів ? синтетичного антиоксиданту іонолу в момент обробки клітин 8-оксихіноліном призводить до різкого зниження виходу трансформантів. Отримані дані свідчать про те, що дія хелатора на здатність дріжджів до трансформації опосередкована їхнім впливом на перекисне окиснення мембранних ліпідів.

It is found that the pretreatment of yeast Saccharomyces cerevisiae (strains 746 and LL-20) cells with the chelating agents of transition metals (8-hydroxyquinoline, 1,10-phe-nanthroline) causes the appearance of competence for plasmid DNA transformation. The factors affecting the efficiency of yeast cell transformation are studied using 8-hydroxyquinoline and double-replicon plasmid RB4. Transformant yield under application of such a method reached 4×10³-2×10⁴ transformations per 10 u.g of plasmid DNA. The chelating agents are shown to increase lipid peroxide formation in yeast. The addition of the lipid oxidation inhibitor (ionol, the synthetic antioxidant) during cell treatment with 8-hydroxyquinoline decreases the transformant yield. The data obtained indicate that the effect of chelators on the yeast competence for transformation may be due to their influence on the membrane lipid peroxidation.