Hypoxia-dependent expression of ADAM8 in human pancreatic cancer cell lines

Abstract

One of the most characteristic features of malignant tissue is the high level of intratumoral hypoxia, which is considered as a powerful factor for induction of tumor aggressiveness and malignant progression. Pancreatic cancer (PC) is a near fatal disease with very unfavorable clinical outcome despite the application of different treatment regimes. It was shown that PC is characterized by high level of hypoxia. Aim: To clarify the correlation between tumor hypoxia and ADAM8 protein expression. Materials and Methods: ASPC-1, Panc-1, BxPC-3, Capan-1, MiaPaCa-2, Colo-357, Su8686 and T3M4 cell lines were used in the study. Expression of mRNA ADAM8 was evaluated by real-time quantitative polymerase chain reaction method. Immunoblot analysis was used to evaluate the expression of ADAM8 protein. Results: Hypoxia induced a 2.5–5.9-fold increase of ADAM8 mRNA levels of in the examined pancreatic cancer cell lines except Panc-1 (p = 0.046). On the protein level, hypoxia induced a 1.2–5.9-fold increase of the ADAM8 prodomain removal form (90 kDa) in 5/8 pancreatic cancer cells. Moreover, hypoxia induced a 1.3–2.0-fold increase of the remnant form ADAM8 (60 kDa) in 4/8 pancreatic cancer cell lines: Aspc-1, Colo-357, Panc-1, T3M4. Conclusion: It was observed the clear tendency in the increase both of ADAM8 mRNA and ADAM8 protein levels in pancreatic cancer cell lines under hypoxia compared to normal conditions of oxygenation. A potential role of ADAM8 as a hypoxia-dependent protein in the pathogenesis and evolution of pancreatic cancer that is characterized by high level of intratumoral hypoxia can be suggested.

Введение: известно, что характерной чертой злокачественных опухолей является внутриопухолевая гипоксия, положительно влияющая на злокачественную прогрессию. Рак поджелудочной железы (РПЖ) является очень агрессивной опухолью, обладающей высокой способностью к инвазии в близлежащие ткани и органы, что обусловливает неудовлетворительные результаты лечения. Показано при этом, что РПЖ относится к новообразованиям с высокой степенью гипоксии. Цель: установление возможной зависимости экспрессии белка АДАМ8 и его мРНК от уровня оксигенации клеток. Материалы и методы: использовали клеточные линии РПЖ человека. Экспрессию мРНК и белка ADAM8 определяли методами qRTPCR и вестерн-блот-анализа соответственно. Результаты: установлено, что гипоксия индуцировала повышение уровня мРНК АDAM8 в 2,5–5,9 раза в исследованных клеточных линиях РПЖ, за исключением клеток линии Panc-1. В клетках линий BxPC-3, Capan-1 и Su8686 выявлено наиболее значительное возрастание уровня экспрессии мРНК ADAM8 при гипоксии (p = 0,046). С помощью вестерн-блот-анализа показано, что экспрессия удаляемой формы продомена ADAM8 (90 kDa) усиливалась в несколько раз при гипоксии в 5 из 8 изученных клеточных линий РПЖ. Гипоксия индуцировала повышение экспрессии остаточной формы ADAM8 (60 kDa) в 4 из 8 клеточных линий РПЖ: Aspc-1, Colo-357, Panc-1, T3M4, хотя изменения оказались умеренно выраженными. Выводы: в клеточных линиях РПЖ человека отмечается четкая тенденция к повышению при гипоксии уровня экспрессии, как мРНК, так и белка ADAM8, что позволяет предположить зависимость экспрессии от уровня оксигенации и потенциальную роль ADAM8 в развитии и прогрессии РПЖ, который отличается высокой степенью внутриопухолевой гипоксии.