Promotive effects of hyperthermia on the сytostatic activity to ehrlich ascites tumor cells by diverse delta-alkyllactones

Abstract

To evaluate promotive effects of hyperthermia on antitumor activity of new delta-alkyllactones (DALs) of low molecular weight (184–254 Da), chemically synthesized, which are different from natural macrocyclic lactones of high molecular weight (348–439 Da), such as camptothecin and sultriecin. Methods: A suspension of Ehrlich ascites tumor (EAT) cells was mixed with a DAL in a glass tube, heated at 37 or 42 °C for 30 min in a water bath, and cultured at 37 °C for 20 or 72 h. Cell viability was measured by the mitochondrial dehydrogenase- based WST-1 assay. DALs incorporated into EAT cells was extracted and measured by gas-liquid chromatography. Results: The reduction of cell viability by DALs was markedly enhanced upon the treatment at 42 °C compared to that at 37 oC. At 37 oC, delta-hexadecalactone (DH16 : 0) and delta-tetradecalactone (DTe14 : 0) displayed cytostatic activity (at 100 µM survival level: 20.7%, 66.1%; at 50 µM — 41.2%, 82.4%, respectively). Their activity was more marked at 42 °C (at 100 µM 10.6%, 27.6%; at 50 µM 30.6, 37.5 %, ibid). The other DALs, delta-undecalactone (DU11 : 0), delta-dodecalactone (DD12 : 0), and delta-tridecanolactone (DTr13 : 0) were almost ineffective. Evaluation of survival rate in the cells treated for 30 min by DALs with the next culturing of EAT cells for 72 h resulted in the enhanced carcinostatic activity of DH16:0 and DTe14:0 even at concentrations as low as 25 µM at either 37 °C (18.5%, 78.5%, ibid) or 42 °C (5.0%, 42.0%, ibid), but the others exhibited slight activity or none. DH16 : 0 was effective at either 37 °C (36.0%) or 42 °C (23.0%) even at a lower dose of 10 µM. At the same time only the most cytostatic DH16 : 0 was incorporated into EAT cells and the rate of incorporation was more at 42 °C than at 37 °C. Conclusion: Delta-hexadecanolactone (DH16 : 0) exhibited the most cytostatic effect that was significantly enhanced by hyperthermia. It allows to consider it as a potent antitumor agent, especially in combination with hyperthermia.

Цель: оценить промоторный эффект гипертермии на противоопухолевую активность новых низкомолекулярных (184–254 Да) дельта-алкиллактонов (DALs), химически синтезированных из разных макроциклических высокомолекулярных (348–439Да) лактонов естественного происхождения, таких как камптотецин и салтриецин. Методы: суспензию клеток асцитной опухоли Эрлиха (EAT) смешивали с DAL в стеклянной пробирке, нагревали до 37 °C или 42 °C в течение 30 мин на водяной бане и далее культивировали при 37 °C в течение 20 или 72 ч. Оценку жизнеспособности клеток проводили с помощью WST-1 анализа, основанного на определении митохондриальной дегидрогеназы. Инкорпорированные в EAT-клетки DALs экстрагировали, их уровень измеряли с помощью газо-жидкостной хроматографии. Результаты: DALs значительно снижали жизнеспособность клеток после предварительной обработки при 42 °C по сравнению с 37 °C. При 37 °C были эффективными дельта-гексадекалактон (DH16 : 0) и дельта-тетрадекалактон (DTe14 : 0) (при 100 μM уровень выживаемости: 20,7; 66,1%; при 50 μM — 41,2; 82,4% соответственно). Этот эффект был более выраженным при 42 °C (при 100 μM 10,6; 27,6%; при 50μM 30,6; 37,5% соответственно). Другие DALs, а именно дельта-ундекалактон (DU11 : 0), дельта-додекалактон (DD12 : 0) и дельта-тридекалактон (DTr13 : 0) были практически не эффективны. Оценка уровня выживаемости EAT-клеток, 30 мин обработанных DALs с последующим культивированием в течение 72 ч, показала повышенную канцеростатичсекую активность DH16 : 0 и DTe14 :0 даже при 25 μM концентрации, как при 37 °C (18,5; 78,5% соответсвенно), так и при 42 °C (5,0; 42,0% соответственно). Для других DALs данный эффект был незначительный либо отсутствовал. DH16 : 0 оставался эффективным как при 37 °C (36,0%), так и при 42 °C (23,0%) в 10 μM концентрации. В то же время только наиболее эффективный DAL — DH16 : 0 инкорпорировался в клетки EAT, и уровень инкорпорирования был выше при 42 °C, чем при 37 °C. Выводы: дельта-гексадеканолактон (DH16 : 0) показал наибольшую цитостатическую активность, которая значительно усиливалась в комбинации с гипертермией. Этот DAL можно рассматривать как потенциальный цитостатик, действие которого усиливается при гипертермии.