Криоконсервирование мультиклеточных сфероидов, полученных из надпочечников новорожденных поросят

Abstract

Специальные технические приемы культивирования клеток разных органов животных и человека позволяют получать мультиклеточные сфероиды (МС), обеспечивающие пространственное микроокружение клеток, в отличие от стандартной культуры, в которой клетки пребывают в монослое. Ранее показано, что из МС, формирующиеся в культуре клеток надпочечников новорожденных поросят, выселяются нейробластоподобные клетки, экспрессирующие маркер нейронов β-III-тубулин. В данной работе были апробированы режимы криоконсервирования МС с использованием 5, 7 и 10% растворов диметилсульфоксида (ДМСО) и 25% фетальной телячьей сыворотки (FBS). На основе результатов анализа некоторых характеристик криоконсервированных МС (адгезии к поверхности, способности к продуцированию нейробластоподобных клеток и формированию монослоя фибробластоподобными клетками) установлено, что наиболее оптимальным был режим криоконсервирования со скоростью охлаждения 1 град/мин в присутствии 10% ДМСО. Добавление в среду FBS значимо не влияло на результат криоконсервирования, но при этом отмечено увеличение вероятностивыселения нейробласто- и фибробластьподобных клеток из криоконсервированных МС.

Спеціальні технічні прийоми культивування клітин різних органів тварин і людини дозволяють отримувати мультиклітинні сфероїди (МС), які забезпечують просторове мікрооточення клітин, на відміну від стандартної культури, в якій клітини перебувають у моношарі. Раніше показано, що з МС, які формуються в культурі клітин наднирників новонароджених поросят, виселяються нейробластоподібні клітини, що експресують маркер нейронів β-III-тубулін. У даній роботі були протестовані режими кріоконсервування МС із використанням 5, 7 и 10% розчинів диметилсульфоксиду (ДМСО) і 25% фетальної телчої сироватки (FBS). На основі результатів аналізу деяких характеристик кріоконсервованих МС (адгезії до поверхні, здатності до продукування нейробластоподібних клітин і формування моношару фібробластоподібними клітинами) встановлено, що найбільш оптимальним був режим зі швидкістю охолодження 1 град/хв у присутності 10% ДМСО. Додавання FBS значуще не впливало на результат кріоконсервування, хоча спостерігалася тенденція до збільшення ймовірності виселення нейробласто- та фібробластоподібних клітин із кріоконсервованих МС.

Application of special in vitro culture techniques for the cells, derived from different animal and human organs, makes possible the obtaining of multicellular spheroids (MSs), being the natural 3-D environment for cells unlike the standard culture with the cells in monolayer. Previously we have shown that MSs formed in the newborn piglet adrenal cell culture are capable to produce the neuroblast-like cells, expressing the neuronal marker β-III-tubulin. In the present work we have assessed the regimens for MSs cryopreservation using 5, 7 and 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) and 25% fetal bovine serum (FBS). Analysis of some characteristics of cryopreserved MSs (surface adhesion, capability to produce the neuroblast-like cells and monolayer formation by fibroblast-like cells) allowed to choose the cryopreservation regimen with 1 deg/min cooling rate in the presence of 10% DMSO as the most optimal one. The FBS supplement to the medium did not significantly affect the cryopreservation outcome, although there was found a tendency to increase the capability of cryopreserved MSs to produce the neuroblast- and fibroblast-like cells.