Сравнение методов оценки жизнеспособности клеток эмбриональной печени человека после криоконсервирования

Abstract

Проведен сравнительный анализ результатов оценки жизнеспособности свежевыделенных и криоконсервированных клеток эмбриональной печени (КЭП) человека по неспецифическим тестам: витальному окрашиванию клеток трипановым синим, бромистым этидием (БЭ); гидролизу флюоресцеин диацетата (ФДА) во флюоресцеин; способности клеток к адгезии. Проведенные тесты отражают различные аспекты клеточной жизнеспособности. Окрашивание трипановым синим и бромистым этидием давало сходные результаты. ФДА-тест не выявляет действительное количество жизнеспособных КЭП. Комбинацией 3-х методов оценки жизнеспособности была выявлена фракция клеток, устойчивых к витальным красителям, в которых не обнаруживался флюоресцеин. Тест на неспецифическую адгезию позволяет исследовать сохранность клеток адгезивного пула эмбриональной печени. На фоне сохранения количества адгезировавших КЭП после криоконсервирования выявлены морфологические отличия клеток, прикреплявшихся к пластику, по сравнению с нативным контролем. Сочетанное использование указанных тестов позволяет давать более полную первичную характеристику гетерогенных суспензий недифференцированных клеток, в частности эмбриональной печени человека.

Проведено порівняльний аналіз результатів оцінки життєздатності нативних і кріоконсервованих клітин ембріональної печінки (КЕП) людини за неспецифічними тестами: вітальним фарбуванням клітин трипановим синім, бромистим етидієм; гідролізом флюоресцеїн діацетату (ФДА) у флюоресцеїн; здатністю клітин до адгезії. Проведені тести відображали різні аспекти клітинної життєздатності. Фарбування трипановим синім і бромистим етидієм давало подібні результати. ФДА-тест не показує дійсну кількість життєздатних КЕП. Комбінацією 3-х методів оцінки життєздатності була виявлена фракція КЕП, стійких до вітальних барвників, в яких не знайдено флюоресцеїну. Тест на неспецифічну адгезію дозволяє досліджувати цілість клітин адгезивного пулу ембріональної печінки. При збереженні кількості адгезуючих КЕП після кріоконсервування було виявлено морфологічні відмінності клітин, що прикріплювались до пластика, у порівнянні з нативним контролем. Сумісне використання зазначених тестів дозволяє давати більш повну первинну характеристику гетерогенних суспензій недиференційованих клітин, зокрема ембріональної печінки людини.

There was carried out a comparative analysis of the results on the estimation of viability for freshly isolated and cryopreserved human fetal liver (HFL) cells using non-specific tests: vital staining of cells with trypane blue, ethydium bromide (EB), fluorescein diacetate (FDA) hydrolysis to fluorescein; ability of cell to adhesion. The performed tests reflect various aspects of cell viability. Staining with trypane blue and EB produced the similar results. FDA-test does not reveal a real number of viable HFL cells. The fraction of cells resistant to vital dyes, where no fluoresceine was found, was revealed by the combination of three methods of viability assessment. The non-specific adhesion test allows to estimate the integrity of HFL cells of adhesive pool. Simultaneously with keeping the number of adhesive HFL cells after cryopreservation there were found the morphological differences of cells, being adhered to the plastic, comparing to the native control. Combined usage of stated tests allows to provide the more complete primary characteristics of heterogenous suspensions of non-differentiated cells, in particular, HFL ones.