Криомикроскопический анализ замораживания эмбрионов мыши ранних стадий развития

Abstract

В работе методом криомикроскопии изучено влияние предварительного обезвоживания эмбрионов мыши ранних стадий развития и их насыщения высокой концентрацией проникающего криопротектора этиленгликоля на вероятность внутриклеточного льдообразования. Показано, что предварительное обезвоживание в 0,5 и 1,0 М растворах NaCl и сахарозы не исключает внутриклеточную кристаллизацию. Установлено, что использование криоконсервирующей смеси (100%-го этиленгликоля и 1 М сахарозы в соотношении 3:7) приводит к стеклованию даже при медленных скоростях замораживания (5°С/мин).

В роботі методом кріомікроскопії вивчено вплив попереднього зневоднення ембріонів миші ранніх стадій розвитку і їх насичення високою концентрацією проникаючого кріопротектора етиленгліколю на вірогідність внутрішньоклітинного льодоутворення. Показано, що попереднє зневоднення в 0,5 і 1,0 М розчинах NaCI і сахарози не виключає внутрішньоклітинної кристалізації. Встановлено, що використання кріоконсервуючої суміші (100%-го етиленгліколю і 1 М сахарози в співвідношенні 3:7) призводить до склування навіть при повільних швидкостях заморожування (5°С/мин).

There was studied the effect of preliminary dehydration of mouse embryos at early stage of development and their saturation with penetrating cryoprotectant, ethylene glycol of high concentration on the probability of intracellular ice formation. It has been shown that preliminary dehydration in 0.5 and 1.0 M NaCl and sucrose solutions does not exclude an intracellular crystallisation. The mixture (100% ethylene glycol and 1M sucrose in the 3:7 ratio) as cryopreserving medium has been found resulting in vitrification even at slow freezing rates (5°C/min).