Генетическая трансформация растений льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) химерным геном GFP-TUA6 для визуализации микротрубочек

Abstract

Представлены результаты по агробактериальной трансформации ряда сортов льна-долгунца, районированных в Республике Беларусь и Украине, плазмидой, которая содержит химерный ген GFP-TUA6 и селективный ген nptII. При проведении экспериментов учитывали факторы, влияющие на эффективность трансформации, а именно оптическую плотность, время инокуляции эксплантов с агробактерией и условия кокультивирования. На селективной среде, содержащей канамицин в концентрации 100 мг/л, отобраны линии, трансгенная природа которых подтверждена с помощью ПЦР-анализа. Экспрессию химерного гена GFP-TUA6 изучали с помощью конфокальной лазерной микроскопии. Полученные нами линии в дальнейшем могут быть использованы для углубленного изучения роли микротрубочек в формировании волокон, а также механической устойчивости к полеганию у льна-долгунца.

Представлено результати з агробактеріальної трансформації ряду сортів льону-довгунця, районованих на територіях Білорусі та України, за допомогою плазміди, що містила химерний ген GFP-TUA6 та селективний маркерний ген nptII, який несе стійкість до канаміцину. При проведенні трансформації враховували фактори, що впливають на ефективність трансформації, а саме оптичну щільність, оптимальний проміжок часу інокуляції експлантів з агробактерією та умови кокультивування. На селективному середовищі, що містило канаміцин в концентрації 100 мг/л, відібрано лінії, трансгенна природа яких була підтверджена за допомогою ПЛР-аналізу. Експресію химерного гена GFP-TUA6 детектовано за допомогою лазерної скануючої конфокальної мікроскопії. Отримані в ході наших досліджень лінії в подальшому можуть бути використані для поглибленого вивчення ролі мікротрубочок в процесах формування волокна, а також механічної стійкості до полягання у льону-довгунця.

The data of Agrobacterium-mediated transformation of some Linum usitatissimum cultivars zoned on the territories of Belarus and Ukraine with the plasmid carrying chimeric GFP-TUA6 gene and nptII gene as selectable marker conferring resistance to kanamycin are presented in this study. Transformation was affected by a number of factors including optical density (OD600), time of inoculation of explants with Agrobacterium and co-culture conditions. Transgenic nature of obtained lines was confirmed by PCR analysis. Expression of GFP-TUA6 gene was detected with confocal laser scanning microscopy. The obtained transgenic lines can be used for further functional studies the role of microtubules in the processes of building the flax fibres and resistance to wind.