Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Abstract

Availability of an efficient transfection protocol is the first determinant in success of gene transferring studies in mammalian cells which is accomplished experimentally for every single cell type. Herein, we provide data of a comparative study on optimization of transfection condition by electroporation and chemical methods for Huh-7 and Vero cells. Different cell confluencies, DNA/reagent ratios and total transfection volumes were optimized for two chemical reagents including jetPEI™ and Lipofectamine™ 2000. Besides, the effects of electric field strength and pulse length were investigated to improve electroporation efficiency. Transfection of cells by pEGFP-N1 vector and tracking the expression of GFP by FACS and Fluorescence Microscopy analysis were the employed methods to evaluate transfection efficiencies. Optimized electroporation protocols yielded 63.73 ± ± 2.36 and 73.9 ± 1.6 % of transfection in Huh-7 and Vero cells respectively, while maximum achieved level of transfection by jetPEI™ was respectively 14.2 ± 0.69 and 28 ± 1.11 % for the same cells. Post transfectional chilling of the cells did not improve electrotransfection efficiency of Huh-7 cells. Compared to chemical based reagents, electroporation showed the superior levels of transfection in both cell lines. The presented protocols should satisfy most of the experimental applications requiring high transfection efficiencies of these two cell lines.

Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий.