Онкологія

Вплив О₂- та no-генеруючої активності нейтрофілів на ефективність неоад’ювантної променевої терапії у хворих на рак прямої кишки

Thu, 01 Jan 2015 00:00:00 GMT

Вплив О₂- та no-генеруючої активності нейтрофілів на ефективність неоад’ювантної променевої терапії у хворих на рак прямої кишки Бурлака, А.П.; Голотюк, В.В.; Вовк, А.В.; Лукін, С.М.; Сидорик, Є.П. Мета: вивчити особливості генерування супероксидних радикалів (О₂-) та оксиду азоту (NO) нейтрофілами крові хворих на рак прямої кишки (РПК) та зв’язок цих параметрів із виживаністю. Об’єкт і методи: досліджено нейтрофіли, виділені з крові 58 хворих на РПК ІІ–ІІІ стадії та 20 здорових донорів. Визначення О₂- та NO-генеруючої активності нейтрофілів проводили методом електронного парамагнітного резонансу з використанням технології спінових уловлювачів. Результати: у більшості хворих на РПК виявлено високі рівні О₂- генеруючої активності нейтрофілів. При проведенні неоад’ювантної променевої терапії (НПТ) та НПТ з одночасним введенням радіомодифікатора спостерігали транзиторне зниження О₂- генеруючої активності нейтрофілів в обох групах пацієнтів. У хворих І групи, які одержали лише курс НПТ, рівень О₂- на момент операції знову зростав, перевищуючи медіану показника (> 0,31 нМ/105 клітин·хв). У пацієнтів, які на фоні НПТ отримували тегафур (ІІ група), активність генерування О₂- хоч і підвищилася, але не досягла медіани (< 0,31 нМ/105 клітин·хв). Зареєстровано достовірне зниження NO-генеруючої активності нейтрофілів на всіх етапах дослідження (до початку лікування, під час НПТ, перед операцією). Загальна та безрецидивна виживаність пацієнтів, у яких до початку лікування рівень активності НАДФ·Н-оксидази був нижчим за медіану (< 0,31 нМ/105 клітин·хв), виявилася статистично достовірно кращою, ніж у пацієнтів із вищою активністю генерування О₂- (> 0,31 нМ/105 клітин·хв) за обох схем передопераційного лікування. Висновок: моніторинг супероксид-генеруючої активності нейтрофілів у хворих на РПК може бути додатковим показником прогнозування ефективності лікування.; Aim: to explore the features of superoxide radicals (О₂-) and nitric oxide (NO) generation by neutrophils of blood of patients with rectal cancer (RC) and the correlation between these parameters and survival rates. Object and methods: neutrophils isolated from the blood of 58 patients with RC at stage II–III and those of 20 healthy donors were investigated. The determination of О₂- and NO-generating activity of neutrophils was performed by electron paramagnetic resonance method using the spin trap technology. Results: in the vast majority of cancer patients high levels of О₂- generating activity of neutrophils were revealed. During the neoadjuvant radiotherapy (NRT) and NRT with simultaneous injection of a radiomodifier a transient decrease of О₂- generating activity of neutrophils was observed in both groups of patients. In the group I of patients who received only NRT course, before the surgery О₂- level increased again, exceeding the median of the index (> 0.31 nM/105 cell·min). Although in patients who were receiving tegafur on the background of NRT (group II) О₂- generation activity increased, but it had not reached the median (< 0.31 nM/105 cell·min). A signifi cant decrease in NO-generating activity of neutrophils was re gistering at all stages of the study (before treatment, du ring the NRT, before surgery). The overall survival and relapse-free survival of patients, whose level of acti vity of NADP·H-oxidase before the treatment was less than the median (< 0.31 nM/105 cells·min), statistically were signifi - cantly better than in patients with higher activity of О₂- generation (> 0.31 nM/105 cells·min) for both presurgery schemes. Conclusion: m onitoring of superoxide-generating activity of neutrophils in patients with RC may be an additional indicator for the prediction of treatment eff ectiveness.

Содержание CD133⁺ И CD15⁺ стволовых неопластических клеток в опухолях и лимфоцитов в периферической крови больных с глиомами различной степени анаплазии

Fri, 01 Jan 2016 00:00:00 GMT

Содержание CD133⁺ И CD15⁺ стволовых неопластических клеток в опухолях и лимфоцитов в периферической крови больных с глиомами различной степени анаплазии Лисяный, Н.И.; Гнедкова, И.А.; Бельская, Л.Н.; Станецкая, Д.Н.; Семенова, В.М.; Малышева, Т.А.; Шмелева, А.А.; Гнедкова, М.А. Цель: изучить содержание стволовых клеток в глиомах головного мозга с учетом степени анаплазии и сопоставить его с процентным и абсолютным содержанием лимфоцитов в периферической крови больных. Объект и методы: изучены опухоли головного мозга 79 больных (материал получен во время оперативного вмешательства): 17 астроцитом фибриллярно-протоплазматических, 28 анапластических астроцитом, 34 глиобластомы. Фенотип опухолевых клеток исследовали иммунофлуоресцентным методом на проточном цитофлуориметре («Beckman Coulter», США). Фенотип опухолевых клеток определяли с помощью МкАТ CD133 («Millipore») к антигену CD133 и конъюгата МкАТ к антигену CD15 FITC («Becton Dickinson», США). Содержание лимфоцитов в периферической крови у больных (абсолютное и относительное) изучали общепринятыми методами. Результаты: установлено, что в глиомах содержатся два типа стволовых клеток — CD133⁺ и CD15⁺, их содержание увеличивается с повышением степени анаплазии глиомы. Отмечено также, что содержание CD15⁺ клеток в ткани каждого гистологического варианта глиомы было в 2 раза больше, чем CD133⁺. В параллельных исследованиях установлено достоверное снижение процентного и абсолютного содержания лимфоцитов впериферической крови больных приповышении степени анаплазии опухоли мозга. Наибольшее содержание CD133⁺ иCD15⁺ клеток отмечено при продолженном росте злокачественных глиом III–IV степени анаплазии, который сопровождался достоверно наименьшим содержанием лимфоцитов в периферической крови. Высказано предположение, что наличие рецепторов CD15 наопухолевых ииммунокомпетентных клетках обусловливает подавление иммунного ответа на клетки глиомы и развитие иммуносупрессии. Вывод: одним из механизмов развития иммуносупрессии при глиомах головного мозга может являться увеличение содержания и активация стволовых клеток глиом, хотя не исключен и другой механизм— развитие иммуносупрессии индуцирует активацию пролиферации стволовых клеток опухолей. Изучение взаимодействия стволовых клеток опухолей и иммунокомпетентных клеток будет способствовать разработке новых подходов к иммунотерапии.; Aim of this study was to investigate the content of stem tumor cells CD133⁺ and CD15⁺ in the gliomas depending on the degree of anaplasia tumor and to compare in percentage and absolute content lymphocytes in peripheral blood of these patients. Objects and methods: bioptic material of 79 gliomas: low level astrocytomas II grade — 17; anaplastic astrocytomas III grade — 28 and glioblastomas IV grade — 34 was studied. Phenotype of tumor cells was estimated by means of immunofruorescent method on cytofluorometr («Beckman Coulter», USA) according to protocol. Phenotype of tumor cells was determined by means of monoclonal antibody (mAb) to molecular CD133 («Millipore») and CD15FITC («Becton Dickinson», USA). Ordinary methods were used for examine absolute and in percentage content of lymphocytes in peripheral blood of these patients. Results: the results showed two types cells CD133 and CD15 in gliomas. Their content increases with growth of level of anaplasia gliomas. The content of CD15 cells in every type of glioma was twice more than it was for CD133 cells. It was established a significant degree in percentage and absolute content of lymphocytes in peripheral blood with growth ofthe level anaplasia. The most of content of CD133 and CD15 cells was noted upon prolong growth of malignant gliomas (III–IV) which distinguished a significant level of all content of lymphocytes in peripheral blood. It was supposed the similarity ofCD15 receptors tumor and immunocompetent cells causes the suppression of immune answer on tumor cells and the development of immunosupression. Conclusion: one of the mechanism development of immunosupression upon gliomas is the increase of content and activation of stem gliomas cells. On another side, the development of immunodepression may causes the activity of proliferation of stem cells too. The study of the interaction stem cells glioma and immunocompetent cells will be useful for working out the new approaches in immunotherapy.

The IL-2-STAT5 pathway is blocked in chronic lymphocytic leukemia cells

Sun, 01 Jan 2017 00:00:00 GMT

The IL-2-STAT5 pathway is blocked in chronic lymphocytic leukemia cells Matveeva, A.; Kovalevska, L.; Polischuk, A.; Kashuba, E. Aim: to study the status of the interleukin-2 (IL-2) pathway in chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells, to understand functional differences between CLL and the normal mature B-cells. Objects and methods: samples of peripheral blood of patients with CLL, RNA isolation, analysis of expression of transcription factors, using RT2 profiler assay and quantitative polymerase chain reaction, bioinformatics analysis of publicly available data bases on expression. Results: we have found that the JAK-STAT5 pathway is largely inactivated in CLL cells. Despite elevated expression of STAT2 and STAT5 genes at the mRNA level, STAT5-responsive genes, such as BCL2L1 (BCL-XL), CCND2 (Cyclin D2), HIF1A, ID1, MCL1, and MYC are down-regulated in CLL cells, compared to peripheral blood B-cells of healthy individuals. Conclusions: the inactivation of the JAK-STAT5 pathway could be explained by the high levels of soluble IL-2RA, as was reported earlier. Another possibility could be inhibition of STAT5 phosphorylation, leading to inability to form the active transcriptionally protein heterodimers. The phosphorylation status of STAT proteins in CLL cells should be further illuminated.; Мета: вивчити стан шляху інтерлейкіну-2 (IL-2) у клітинах хронічного лімфоцитарного лейкозу (ХЛЛ), щоб зрозуміти функціональні відмінності між ХЛЛ і зрілими B-клітинами. Об’єкти і методи: зразки периферичної крові хворих наХЛЛ, ізоляція РНК, аналіз експресії транскрипційних факторів із використанням аналізу плати RT2 та кількісної полімеразної ланцюгової реакції, біоінформатичний аналіз загальнодоступних баз даних щодо експресії генів. Результати: виявлено, що сигнальний шлях JAK-STAT5 переважно інактивований в клітинах ХЛЛ. Незважаючи на підвищену експресію генів STAT2 та STAT5 на рівні мРНК у клітинах ХЛЛ експресія генів, які трансактивуються STAT5, таких як BCL2L1 (BCL-XL), CCND2 (циклін D2), HIF1A, ID1, MCL1 та MYC, знижена порівняно з цим показником у В-клітинах периферичної крові здорових донорів. Висновки: інактивація шляху JAK-STAT5 може бути пояснена високим рівнем розчинного IL-2RA, як було показано раніше. Також є можливим інгібування фосфорилювання протеїну STAT5, що робить неможливим утворення гетеродимерів білків, які є транскрипційно активними. Стан фосфорилювання білків STAT у клітинах ХЛЛ потребує додаткового вивчення.

Оцінка цитотоксичної активності лектиноподібної речовини B. subtilis B-7724 у системі in vitro

Mon, 01 Jan 2018 00:00:00 GMT

Оцінка цитотоксичної активності лектиноподібної речовини B. subtilis B-7724 у системі in vitro Федосова, Н.І.; Караман, О.М.; Воєйкова, І.М.; Симчич, Т.В.; Іванченко, А.В.; Черемшенко, Н.Л.; Круць, О.О.; Діденко, Г.В. Мета: оцінка in vitro цитотоксичної дії на пухлинні та імунокомпетентні клітини лектину, виділеного з фільтрату культуральної рідини Bacillus subtilis В-7724 за модифікованим методом. Об’єкт і методи: лектиноподібну речовину (ЛПР) отримували із культуральної рідини В. subtilis В-7724 після 10-добового культивування на стандартизованому середовищі Гаузе. Досліджували in vitro цитотоксичну активність ЛПР проти клітин пухлинних (раку Ерліха, меланоми В16, А549, К562) або умовно нормальних (MDBK) клітинних ліній, а також клітин імунокомпетентних органів інтактних мишей лінії Balb/c. Оцінку цитотоксичного впливу проводили, використовуючи цитоморфологічний аналіз за допомогою світлового мікроскопа та колориметричний МТТ-тест. Статистичну обробку результатів проводили за загальноприйнятими методами. Вірогідність різниці між контрольними та дослідними вимірами оцінювали за t-критерієм Стьюдента. Результати: ЛПР, виділена з середовища росту мікроорганізму B. subtilis В-7724, виявляє дозозалежну цитотоксичну активність щодо клітин різних модельних пухлин: мінімальну активність виявляє в концентрації 0,02 мг/мл, максимальну — 0,1 мг/мл. Серед клітин перевивних пухлинних ліній найбільш чутливою виявилася меланома В16: індекс цитотоксичності (ІЦ) становив 72,3% (0,02 мг/мл) та 97,2% (0,04 мг/мл). Практично нечутливими до цитотоксичної дії ЛПР були клітини лінії К562: ІЦ = 13,4% (0,02 мг/мл) та 22,3% (0,04 мг/мл). Серед клітин імунокомпетентних органів найбільш чутливими до дії ЛПР виявилися клітини тимуса. Більш резистентні клітини макрофагальної ланки: додавання ЛПР в концентрації 0,02 мг/мл практично не мало цитотоксичного впливу: через 60 хв ІЦ = 14,8%, через 24 год — 60,9%. Імунотоксичну дію виявляла концентрація ЛПР 0,1 мг/мл (ІЦ 90,2–99,5%). Висновок: концентрації ЛПР 0,02–0,04 мг/мл у подальшому можуть бути використані в дослідах in vivo як такі, що володіють цитотоксичною активністю щодо пухлинних клітин, але водночас не мають суттєвої імунотоксичної дії. Одержані результати можуть стати підґрунтям для вдосконалення напрямків і методів використання ЛПР B. subtilis B-7724 в онкологічній клінічній практиці.; Objective: in vitro evaluation of cytotoxic activity in relation to tumor cells of various lines and immunotoxic activity of lectin-like substance (LLS) isolated from the culture liquid medium filtrate of В. subtilis В-7724 by the modified method. Object and methods: LLS was obtained from the culture medium B. subtilis B-7724, after 10-day cultivation on a standardized medium. The in vitro cytotoxic activity of LLS was investigated in relation to tumor cells (Ehrlich cancer, melanoma B16, A549, K562) or conditionally normal (MDBK) cell lines, as well as cells of the immune-competent organs of Balb/c intact mice. The evaluation of the cytotoxic effect was performed using a cytomorphological analysis using a light microscope and a colorimetric MTT test. The wells with culture medium and target cells, which did not add the test drug, served as control. Statistical processing of the results was carried out according to commonly accepted methods. The probability of the difference between control and experimental measurements was estimated by the Student t-criterion. Results: LLS isolated from the growth medium of the microorganism В. subtilis В-7724, detects dose-dependent cytotoxic activity in relation to cells of various model tumors: the minimum activity is found at a concentration of 0.02 mg/ml, maximum — 0.1 mg/ml. Among the cells of transplantable tumor lines, the melanoma B16: cytotoxic index (CI) = 72.3 (0.02 mg/ml) and 97.2% (0.04 mg/ml) was the most sensitive. The cells of the K562 line: CI = 13.4 (0.02 mg/ml) and 22.3% (0.04 mg/ml) were virtually insensitive to the LLS of the cytotoxic action. Among the cells of the immunocompetent organs, the most sensitive to the action of LLS were thymus cells. More resistant macrophage cells: adding LLS at a concentration of 0.02 mg/ml practically did not have a cytotoxic effect: after 60 minutes CI = 14.8%, after 24 hours — 60.9%. Immunotoxic effect showed a concentration of LLS 0.1 mg/ml (CI = 90.2–99.5%). Conclusion: LLS concentrations of 0.02–0.04 mg/ml can be used subsequently in vivo experiments as having cytotoxic activity against tumor cells, but at the same time, have no significant immunotoxic activity. The obtained results can form the basis for improving the directions and methods of using В. subtilis В-7724 LLS in oncology clinical practice.