http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/151030 2026-04-12T11:46:29Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/155648 Создание системы для переноса генов посредством ретровируса на основе Pr-RSV-C с расширенной хозяйской специфичностью Кайда, И.В.; Цыба, Л.А.; Болтовец, П.Н.; Кашуба, В.И. Провирус адаптированного к уткам варианта вируса Pr-RSV-C и его трансформационно-дефектного мутанта послужил основой для создания репликативно-компетентного вектора td da Pr-RSV-C е~ и вируса-помощника td da Pr-RSV-C е PSNeo, необходимого для упаковки рпликативно-дефектного ретровирусного вектора. Для снижения вероятности включения клеточных прото-онкогенов в состав ретровирусного вектора последовательности Е-элемента, предположительно вовлеченные в этот процесс, делетированы. Было показано, что (УГб-клетки, трансформирован­ные последовательностями вируса-помощника td da Pr-RSV-C e'PS'Neo продуцируют вирусные белки, в том числе p27gag7 на уровне, необходимом для. сборки репликативно-дефектного ретровирусного вектора. Помимо этого, из-за модифицирования генома вируса-помощника не происходит включения его собственной РНК в состав вириона и сборки полноценной инфекционной вирусной частицы. Это подтверждается тестированием супернатантов упаковочных клонов методом обратной транскрипции: большинство из них не показывают включения [3Н]ТТР в реакции обратной транскрипции, характерного для репликативно-компетентного вируса.; Провірус адаптованого до качок варіанту вірусу Pr-RSV-C та його трансформаційно-дефектного мутанту став основою для створення реплікативно-компетентного вектора td da Pr-RSV-C е та. вірусу-помічника td da Pr-RSV-C е PS Neo, необхідного для упаковки реплікати&но-дефектного ретро­вірусного вектора. Для того щоб знизити вірогідність вклю­чення клітинних протоопко генів до складу ретровірусного вектора, послідовності Е-елементу, які можуть бути залучені до цього процесу, делетовано. Було показано, що QTb-клітини, трансформовані послідовностями вірусу-помічника td da PrRSV-C е PS Neo, продукують вірусні білки, зокрема p27gag, у кількості, необхідній для складання реплікативно-дефектного ретровірусного вектора. Геном вірусу-помічника модифіковано таким чином, що його власна РНК не включається до складу віріону та не відбувається складання повноцінної інфекційної частинки. Цей факт підтверджено тестуванням супернатантів пакуючих клонів методом зворотної транскрипції: більшість з них не показала включення HTTP у реакції зворотної транскрипції, характерного для регигікативно-ком­петентного вірусу,; We have constructed retroviral vector td da Pr-RSV-C e and helper virus td da Pr-RSV-C e' PS'Neo based on the duck-adapted variant of Pr-RSV-C with the extended host ranger and its transformation-defective mutant. To decrease the risk of transducing cell proto-oncogencs, E-element, supposedly involved in this process, was deleted. In order to obtain helper cell line the QT6 cells have been transfected by helper phismid p td da Pr-RSV-C e'PS~Neo. Packaging cells produce viral proteins, including p27gag, but intact helper virus is not detectable in reverse trans criptaxe assay. 1997-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/155647 Genetic mechanisms of Escherichia coli resistance to target inactivation. Genes governing purine metabolism in enterobacteria: an unexpected sequence found via complementation selection Cherepenko, E.; Craig, S. Using enierobacterial strains having block in 3 different genes required for GMP synthesis, 3 groups of inserts with different restriction patterns were expected. But the fragments cloned represented 5 such, groups. One consisted of Salmonella typhimurium DNA fragments with 2 SacI sites available. Sequencing revealed 100 % homology of the cloned insert to the N-tenn of Y protein of the hemC-hemD linkage group of E. coli chromosome (85 min locus). It is suggested that Y may represent the gpp gene, coding for guanosinepentaphosphatase. It was also shown that a Salmonella DNA fragment resulting from PCR amplification with 20-mer primers complementary to the N- and C-terms of the hpt gene of E. coli did not encode an hypoxanthine phosplioribosyltransferase (HPRTase)and some other gene complemented GMP synthesis block in tie novo and salvage pathways in E. coli cells.; Використання штамів ентеробактерій, які дозволяють кло­ну вати три різних гени шляхів синтезу GMP, надавало мож­ ливість одержання трьох груп рестрикційних фрагментів. Однак було клоновано п'ять групп таких фрагментів. Фраг­менти однієї з цих груп вміщували 2 SacI-сайти, Секвенування фрагмента геному Salmonella typhimurium показало 100 % гомологію з N-кінцем гена Y, який належить оперону hemC-hemD Е. coli. Зроблено припущення, що цей фрагмент вміщує ген, подібний гену gpp Е. coli. Також показано, що фрагмент геному S. typhimurium, який комплементує блок синтезу GMP, ампліфікований у PCR-реакції за. допомогою 20-членних прай­ме рів до N- та С-кінців гена hpt Е. coli, не кодує HPRT.; Использование штаммов энтеробактерий, позволяющих кло­нировать три различных гена путей синтеза GMP, предпола­гало получение трех групп рестрикционных фрагментов. Од­нако были клонированы пять групп таких фрагментов. Фраг­менты одной из этих групп содержали 2 SacI-сайта. Секвенирование фрагмента генома. Salmonella typhimurium показало 100 % гомологии с N-концом гена У, принадлежащим оперону hemC-hemD Е. coli Сделано предположение, что этот фраг­мент содержит ген, подобный гену gpp Е. coli Также показано, что фрагмент генома S. typhimurium, комплементирующий блок синтеза GMP, амплифицируемый в PCR-реакции с по­мощью 20-членных прайме ров к N- и С-концам гена hpt Е. coli, не кодирует HPRT. 1997-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/155646 Interaction of cyanine dyes with nucleic acids. 3. The of new cyanine dyes Cyan 13 and Cyan 40 for detection of nucleic acids in agarose gel Yarmoluk, S.M.; Dubey, I.Y. Detection of double-stranded DNA (dsDNA) and single-strended DNA (ssDNA) and RNA with two new cyanine dyes Cyan 13 and Cyan 40 is reported. Cyan 13 and Cyan. 40 bind to nucleic acids to form a stable fluorescent complexes and can be used for the detection of DMA and RNA samples: separated by gel electrophoresis. Sensitivity of detection is comparable to tfat for ethidium bromide (EtBr), a common nucleic add staining dye.; Два нових ціанінових барвники Cyan 13 та Cyan 40 було застосовано для флюоресцентної детекцїі двоспіральної ДНК та односпіральних ДНК і РНК в електрофорезних гелях. Чутливість детекції нуклеїнових кислот цими барвниками схожа з такою бромистого етидію, що звичайно використо­вується для цієї мети.; Два новых цианиновых красителя Cyan 13 и Cyan 40 примене­ны для флюоресцентной детекции двуспиральной ДНК и одно- спиральных ДНК и РНК в электрофорезных гелях. Чувстви­тельность детекции нуклеиновых кислот этими красителями подобна таковой бромистого этидия, который обычно исполь­зуется для этой цели. 1997-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/155645 Transfer of gene conferring herbicide bialaphos resistance into buckwheat plants Rubtsova, M.A.; Levenko, B.A.; Taranenko, L.K.; Stekhin, I.N.; Sayaz, L.I. Bar gene conferring resistance to herbicide bialaphos (phmphinothricin) was cloned from Streptomyces hygroscopicus. Bar gene under 35S promoter of cauliflower mosaic virus was introduced in binary pBin19 vector and constructed plasmid was transferred into Agrcbacterium tumefaciens strain. Conditions of genetic transformation of cultivated buckwlwat and interspecific hybrid Fagopirum esculentum X F. tataricum were worked out. Buckwheat explants were inoculated by the strain with a plasmid carrying bar gene nearby NPTII gene. Molecular analysis of 8 regenereted plants that were selected for kanamycin resistance was performed. 5 plants gave positive signal by dol- and Southern hybridization using as a probe DNA fragment with bar gene that is an evidence of integration of bar gene into plant genome. Transformed plants grow and rooted at Basta concentrations in the medium, that totally inhibited nontransformed plants.; Із Streptomyces hygroscopicus клонували bar-ген, який визначає стійкість до гербіціду біалафосу (фосфінотрицину). Ген під контролем 35S-промотора вірусу мозаїки цвітної капусти було введено у бінарний вектор рВin19 для трансформації рослин. Одержану рекомбінантну плазміду перенесено до шта­му 3850 Agrobacterium tumefaciens. Підібрано умови трансформації культурної гоечхи і міжвидового гібрида Fagopyrum esculentum х F. tatarium. Експланти гречки інокулювали агробактеріальним штамом, у якому bar-ген знаходиться на Тi плазміді поруч з NPTII геном. Здійснено молекулярно-біо­логічний аналіз восьми регенерантів, які пройшли канаміщновий відбір. П'ять рослин дали позитивну радіоавтогра­фічну відповідь при дот- і Саузерн-гібридизації з міченим зондом, який несе bar-ген, що свідчить про інтеграцію цього гена в геном рослин. Трансформовані рослини росли і утворю­вали коріння при концентрації гербіциди басти в середовищі, яке повністю пригнічувало нетрансформовані рослини,; Из Streptomyces hygroscopicus клонировали bar-ген, определяю­щий устойчивость н гербициду биалафосу (фосфинотрицину). Ген под контролем 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты был введен в бинарный вектор рВіп!9 для трансфор-мании растений. Полученная рекомбинантная плазмида перенесена в штамм 3850 Agrobacterium tumefaciens. Подобраны условия трансформации культурной гречихи и межвидового гибрида Fagopyrum esculentum X F. taiaricum. Экспланты гречи­хи инокулировали агробактериальным штаммом, в котором bar-ген находился на Тi плазмиде рядом с геном NPTII Проведен молекулярно-биологический анализ восьми регенераншов, прошедших канамициновый отбор. Пять растений дали положительный радиоавтографический ответ при дот- и Саузерн-гибридизации с меченым зондом, несущим bar-ген, что свидетельствует об интеграции этого гена в геном растений. Трансформированные растения росли и образовывали корни при концентрации гербицида басты в среде, полностью ингибирующей не трансформированные растения. 1997-01-01T00:00:00Z