http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/151002 2026-04-12T17:12:20Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/156257 Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака Богдарина, И.Г.; Мырхова, М.И.; Бурьянов, Я.И. В ходе двух последовательных трансформаций получены трансгенные растения табака с интегрированными в хромосому генетическими конструкциями, включающими ген nptll под конститутивным nos-промотором, а также его антисмысловую форму под индуцибельным промотором hsp70 гена белка теплового шока из Drosophila melanogaster. Практически полное подавление активности неомицинфосфотрансферазы II в таких растениях происходило лишь в условиях теплового шока. Такой же эффект наблюдался в экспериментах по временной экспрессии гена nptII, введенного в протопласты трансформированного табака, содержащего только антисмысловой ген nptll под промотором гена hsp70. Следовательно, в трансгенных растениях промотор гена белка теплового шока может быть использован в антисмысловых генетических конструкциях для индуцированного подавления генетической экспрессии.; Протягом двох послідовних трансформацій отримано трансгенні рослини тютюну з інтегрованими до хромосоми генетичними конструкціями, які мають ген nptll під конститутивним nos-промотором, а також його антисенсову форму під іyдуци бельним промотором hsp70-гена. білка теплового шоку з Drosophila melanogaster. Практично цілковите пригнічення активності неоміцинфосфотрансферази II у таких рослинах відбувалося лише за умов теплового шоку. Той самий ефект спостерігався в експериментах з почасової експресії гена nptll, введеного до протопластів трансформованого тютюну, який містив лише антисенсовий ген nptllпід промотором гена hsp70. Отже, у трапесенпих рослинах промотор теплового шоку може використовуватися в антисенсових генетичних конструкціях для індукованого пригнічення генетичної експресії.; Double transformed tobacco plants were obtained by successive transformation using two nptll gene constructs: the sense gene under the control of the constitutive nos promoter and the antisense form under the control of the inducible Drosophila melanogaster hsp70 promoter. Virtually total inhibition of the neomycin phosphotransferase II activity was observed in these plants only in response to heat shock. The same effect was observed in experiments on transient expression of the nptll gene in protoplasts of single transformed plants carrying the antisense nptll gene under the hsp70 promoter. Therefore, the hsp70 promoter can be used in anlisens'e gene construction to inducibiy repress gene expression in transgenic plants. 1993-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/156255 The interphase chromatin special state zones Shpilevaya, S. P.; Kostetsky, I. E.; Bilitch, K. M.; Lihatcheva, L. I.; Stolar, T. V.; Irodov, D. M.; Kostetskaya, E. V.; Spivak, I. M.; Zhestyanikov, V. D.; Kordyum, V. A. The possibility is demonstrated of RecA protein of E. coli introduction into eukaryotic cell with preservation of its biologicall activity. The character of this protein affinity to chromatin of different degree of condensation is shown on cytological level (undirect immunofluorescent method combined with cytophotometry) for different stages of cellular cycle (protein is not tested in meta- and anaphase chromosomes). The presence of bacterial RecA protein in the nuclei and cytoplasm of cells both in vitro and in vivo is confirmed with the help of immunoelectron microscopy. Studies were carried out on cultures of HeLa and Ltk⁻ cells and also in vivo on hepatocytes after direct injection on RecA protein and plasmid pKCR2 enclosed in liposomes into the liver of adult mice line BALB/c. Proceeding from the experimental data obtained and also considering the fact that RecA protein mainly connects with single-stranded DNA, the assumption is done about existence of special state chromatin zones (SSCZ). For these zones the active affinity to RecA protein serum is character with intensive fluorescence, thus they may correspond to some actively expressing genes, gathered in clusters.; Показано можливість введення до еукаріотичної клітини RecA-білка Е. coli із збереженням його біологічної активності. На цитологічному рівні (непрямий імунофлюоресцентний метод з цитофотометрією) визначено характер зв'язування RecA- білка з хроматином різного ступеню спіралізації на окремих стадіях клітинного циклу (у мета- і анафазних хромосомах білок не тестується). Присутність бактеріального білка у цитоплазмі і ядрах клітин in vivo та in vitro підтверджена також імуноелектронною мікроскопією. Виходячи з отриманих експериментальних даних та враховуючи переважне зв'язування RecA-білка з онДНК, зроблено припущення про існування зон особливого стану хроматина (ЗOCX), які характеризуються активним зв'язуванням з сироваткою до бактеріального RecA-білка та інтенсивною флюоресценцією і можуть відповідати зібраним у кластери активно експресуючим генам. Експерименти виконано на культурах клітин HeLa і Ltk⁻, а також in vivo на гепатоцитах після прямого введення білка та плазміди pKCR2 у складі ліпосом до печінки дорослих мишей лінії BALB/c.; Показана возможность введения в эукариотическую клетку RecA - белка Е. coli с сохранением его биологической активности . На цитологическом уровне (непрямой иммунофлюоресцентный метод с цитофотометрии ) определен характер связывания RecA - белка с хроматином разной степени спирализации на отдельных стадиях клеточного цикла (в мета- и анафазного хромосомах белок не тестируется ) . Присутствие бактериального белка в цитоплазме и ядрах клеток in vivo и in vitro подтверждено также имуноэлектронной микроскопией . Исходя из полученных экспериментальных данных и учитывая преимущественное связывание RecA - белка с онДНК , высказано предположение о существовании зон особого состояния хроматина ( ЗOCX ) , которые характеризуются активным связыванием с сывороткой к бактериальному RecA - белка и интенсивной флюоресценцией и могут соответствовать собранным в кластеры активно экспрессирующим генам . Эксперименты выполнены на культурах клеток HeLa и Ltk⁻ , ??а также in vivo на гепатоцитах после прямого введения белка и плазмиды pKCR2 в составе липосом в печени взрослых мышей линии BALB/c. 1993-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/156253 Особенности развития толерантных к цефамезину штаммов клебсиелл Авдеева, Л.В.; Лукач, И.Г.; Войцеховский, В.Г.; Сельникова, О.П.; Полищук, Е.И.; Чернявская, Л.Н.; Бондарь, М.В. В камерах для микрокультивирования клеток изучено развитие клеток клебсиелл в присутствии различных концентраций цефамезина. Полученные данные свидетельствуют о различной чувствительности клебсиелл к цефамезину, регистрируемой у асе через 3–5 ч. Кроме того, установлено существование среда клинических изолятов клебсиелл толерантных штаммов (МБК/МПК≥32), способных переживать высокие концентрации антибиотика в виде L-форм, реверсирующих в исходные при замене среды, содержащей антибиотик, на питательную среду. Предполагается, что толерантные штаммы могут быть потенциальными возбудителями внутрибольничных инфекций.; У камерах для мікрокультивування клітин вивчено розвиток клітин клебсієл у присутності різних концентрацій цефамезину. Отримані дані свідчать на користь неоднакової чутливості клебсієл до цефамезину, що реєструється вже за 3– 5 год. Крім того, встановлено існування серед клінічних ізолятів клебсієл толерантних штамів (МБК/МПК≥32), здатних переживати високі концентрації антибіотика у вигляді Л-форм, які реверсують до вихідних при зміні середовища, що містить антибіотик, на поживне середовище. Робиться припущення про те, що толерантні штами можуть бути потенційними збудниками внутрішньолікарняних інфекцій.; n chambers for microorganisms flowing cultivation morphological alterations of Klebsiella's cells in presence of different cefomisine's concentrations were discovered with the using of. Recived results testify to varions sensitivity of Klebsiella's to the cefomisine which was taken in account 3–5 hours later already. In addition Klebsiella's tolerance strains (MBC/MIC≥32) capable to survive in high antibiotic's concentrations in L-forms which reverse to original forms (ones) during the change of antibiotics medium for nutritions one were established among clinical isolates. It is supposed, that tolerance strains are potentially dangererous with hospital-aquired infections. 1993-01-01T00:00:00Z http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/156252 Генетическая трансформация методом листовых дисков диких видов Solanum и Lycopersicon Рудас, В.А.; Завгородняя, А.В.; Череп, Н.Н.; Глеба, Ю.Ю. Проводили исследования по генетической трансформации диких видов родов Solanum и Lycopersicon методом листовых дисков. Получены устойчивые к канамицину растения L. peruuianum var. humifusum, L. peruvianum Mill., L. pennellii, S. aculeatissimum, S. sisymbrifolium, S. gilo, S. mammosum. У видов L. peruvianum var. dentatum, S. rickii, S. Iycopersicoicles, S. nigrum, кроме растений, устойчивых к канамицину, выявлены растения, резистентные к гигромицину, а также к обоим антибиотикам. Результаты анализа активности неомицинфосфотрансферазы (NPTII) подтверждают экспрессию этого гена в трансгенных растениях.; Проводилися дослідження з генетичної трансформації диких видів родів Solaiuim і Licopersicon методом листових дисків. Отримано стійкі до канамІцину рослиниL. peruuianum var. humifusum, L. peruvianum Mill., L. pennellii, S. aculeatissimum, S. sisymbrifolium, S. gilo, S. mammosum. У видів L. peruvianum var. dentatum, S. rickii, S. lycopersicoides, S. nigrum, окрім рослин, стійких до канаміцину, одержано також рослини, стійкі до гігроміцину, а також до обох антибіотиків. Результати аналізу активності неоміцинфосфотрансферази (NPTII) підтверджують експресію цього гена в трансгенних рослинах.; Using Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation kanamycin-resistant plants of Lycopersicon peruvianutn var. humifusum, L. peruvianum Mill., L. pennellii, Solatium aculeatissimum, S. sisymbrifolium, S. gilo, S. mammosum were obtained. By this procedure plants of L. peruvianum var. dentatum, S. rickil, S. lycopersicoides, S. nigrum resistant to kanamycin, hygromycin as well as resistance to both kanamycin and hygromycin were obtained too. Assay of neornycin phosphotransferase (NPTII)-activity confirmed this chimaeric gene expression in the transformed plants. 1993-01-01T00:00:00Z