http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/150978 2026-04-22T20:55:23Z 2026-04-22T20:55:23Z Ахмедов, А.Т. Намсараев, Е.А. Зайцева, Е.М. Зайцев, Е.Н. Ланцов, В.А. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/153125 2019-06-13T22:25:48Z 1990-01-01T00:00:00Z

Изучение рекомбинационной активности в экстрактах клеток млекопитающих Ахмедов, А.Т.; Намсараев, Е.А.; Зайцева, Е.М.; Зайцев, Е.Н.; Ланцов, В.А. Описана бесклеточная система, в которой используются экстракты ядер миелобластов человека, клеток HeLa и семенников крыс для инициации рекомбинации между гомологичными плазмидами, несущими различные мутантные аллели Тс-гена. Инкубация этих плазмид с ядерными экстрактами увеличивала частоту Tсr-рекомбинантов с 2,6·10⁻⁵ до 2,7·10³. Реакция требует ионов Mg²⁺ и не зависит от присутствия ATP и dNTP. Кроме того, использовав чувствительный метод определения реакции переноса нити, мы частично очистили ATP-независимую рекомбиназную активность из ядерных экстрактов семенников крыс. Реакция требует гомологии между ДНК-субстратами и присутствия ионов Mg²⁺.; Описано безклітинну систему, у якій використовують екстракти ядер мієлобластів людини, клітин HeLa і сім’яників щурів для ініціації рекомбінації між гомологічними плазмідами, що несуть різні мутантні алелі Тс-гена. Інкубація цих плазмід з ядерними екстрактами збільшує частоту Tсr-рекомбінантів з 2,6·10⁻⁵ до 2,7·10³. Реакція вимагає іонів Mg²⁺ і не залежить від присутності ATP і dNTP. Крім того, використавши чутливий метод визначення реакції перенесення нитки, ми частково очистили ATP- незалежну рекомбіназную активність з ядерних екстрактів сім’яників щурів. Реакція вимагає гомології між ДНК-субстратами і присутності іонів Mg²⁺.; The cell-free system utilizing nuclear extracts from human mieloblasts, HeLa cells and rat testes to initiate recombination events between homologous plasmids containing different mutant alleles of the Tc gene has been described. The incubation of the plasmids with nuclear extracts increased the frequency of Tcr recombinants from 2,6·10⁻⁵ to 2,7·10³. The reaction required Mg²⁺ and was ATP- and dNTP-independent. In addition while using a sensitive homologous recombination strand-transfer assay ATP-independent strand-transfer activity from nuclear extracts of rat testis have been partially purified. It was homology-dependent and required the presence of Mg²⁺. Similarities between recombinase activity and other known eukaryotic recombinases are under discussion.

1990-01-01T00:00:00Z Асеев, М.В. Иващенко, Т.Э. Горбунова, В.Н. Баранов, В.С. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/153075 2019-06-13T22:26:15Z 1990-01-01T00:00:00Z

ПДРФ-анализ и диагностика гемофилии А при помощи ДНК-зондов Асеев, М.В.; Иващенко, Т.Э.; Горбунова, В.Н.; Баранов, В.С. Методом блот-гибридизации изучен полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) ДНК-последовательностей, тесно сцепленных (зонд St-14) или расположенных внутри, т. е. представляющих собой фрагменты гена фактора (F) VIII: С свертывания крови (р51.61 и р1.8), в ленинградской популяции (контроль) — в семьях высокого риска и непосредственно у больных гемофилией А. Частота ПДРФ-аллелей, выявленная этими зондами, во всех исследованных группах в целом хорошо коррелирует с аналогичными показателями для западноевропейских и североамериканских популяций. В исследованиях с зондом St-14 обнаружены два дополнительных, ранее неописанных аллеля 4,35 и 4,2 т. п. о. Подтверждена высокая информативность внесенного зонда St-14 и сравнительно низкая — внутригенных зондов. Совместное использование трех зондов в семьях высокого риска позволило установить диагноз и подтвердить гетерозиготное носительство гена гемофилии A у 11 u отвергнуть его у двух -женщин — близких родственников пробандов, а также с вероятностью более 95 % осуществить пренатaльную диагностику гемофилии А у плода 9-й недели развития.; Методом блот-гібридизації вивчено поліморфізм довжини рестрикційних фрагментів (ПДРФ) ДНК-послідовностей, тісно зчеплених (зонд St-14) або розташованих усередині, тобто які представляють собою фрагменти гена фактора (F) VIII:С згортання крові (р51.61 і р1.8), у ленінградській популяції (контроль) – у родинах високого ризику і безпосередньо у хворих на гемофілію А. Частота ПДРФ-алелів, виявлена цими зондами, у всіх досліджених групах у цілому добре корелює з аналогічними показниками для західноєвропейських та північноамериканських популяцій. У дослідженнях із зондом St-14 виявлено два додаткових, раніше не описаних алелі 4,35 і 4,2 тис. п. о. Підтверджено високу інформативність внесеного зонда St- 14 і порівняно низька – внутрішньогенних зондів. Спільне використання трьох зондів у родинах високого ризику дозволило встановити діагноз і підтвердити гетерозиготне носійство гена гемофілії A у 11 і відкинути його у двох жінок – близьких родичів пробандів, а також з імовірністю більше 95 % здійснити пренатaльную діагностику гемофілії А у плоду 9 -го тижня розвитку.; RFLP analysis of DNA sequences close to (probe St-14) or inside Factor VIII : C gene (probes p. 51.61 and probe p. 1.8) was carried out in the Leningrad population (control group), in the families with high risk of haemophilia A as well as in patients with haemophilia A. The frequency of corresponding alleles in normal and haemophilia A X chromosomes were in good concordance with relative allelic frequencies in populations of Western Europe and North America. Two rare and previously unkown alleles (4.2 and 4.35 base pairs) were detected in studies with St-14 probe. High informativity of closely linked St-14 probe and low predictive values of tested intragenetic probes have been confirmed. Using RFLP technique with 3 tested probes haemophilia A heterozygotcs carriers have been diagnosed in 11 and rejected in 2 close female relatives of haemophilia patients. Prenatal diagnosis of haemophilia A in a 9-week embryo has been perfotned.

1990-01-01T00:00:00Z Игнатьева, Т.В. Голинский, Г.Ф. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/153074 2019-06-13T22:25:39Z 1990-01-01T00:00:00Z

Моделирование некоторых форм диабета нa трансгенных крысах, экспрессирующих ген гормона роста человека Игнатьева, Т.В.; Голинский, Г.Ф. Разработана методика переноса в геном крыс чужеродных клонированных генов. Получены трансгенные крысы, в геном которых интегрирован ген гормона роста человека под контролем промотора гена тирозинаминотрансферазы (TAT) крысы, а также кДНК-копия гена гормона роста человека под контролем промотора гена металлотионеина 1 мыши. У трансгенных крыс зарегистрирована экспрессия чужеродного гена, причем уровень гормона роста в крови достигал 80 нг/мл, т. е. на порядок превышал контрольный уровень. У животных отмечались также изменения роста. Одна группа их росла быстрее, другая — медленнее контрольных. Из-за экспрессии гена гормона роста человека у трансгенных крыс нарушалась функция островкового аппарата поджелудочной железы: снижалась толерантность к глюкозе и происходило нарушение строения островков (дегрануляция β-клеток, дегенерация и замещение островковой ткани соединительной). Изменения островкового аппарата сохранялись в трех поколениях животных. Трансгенные крысы с жспрессируюіцим геном гормона роста человека являются новой биологической моделью, пригодной для изучения механизмов и разработки методов профилактики и лечения некоторых форм диабета.; Розроблено методику перенесення у геном щурів чужорідних клонованих генів. Отримано трансгенних щурів, у геном яких інтегровано ген гормону росту людини під контролем промотору гена тирозинамінотрансферази (TAT) щура, а також кДНК-копія гена гормону росту людини під контролем промотору гена металотіонеїну 1 миші. У трансгенних щурів зареєстровано експресію чужорідного гена, причому рівень гормону росту в крові досягав 80 нг/мл, тобто на порядок перевищував контрольний рівень. У тварин відзначено також зміни в швидкості росту. Одна група їх росла швидше, інша – повільніше за контрольні. Через експресію гена гормону росту людини у трансгенних щурів порушувалася функція острівковогоапарату підшлункової залози: знижувалася толерантність до глюкози і відбувалося порушення будови острівців (дегрануляція β-клітин, дегенерація і заміщення острівкової тканини сполучною). Зміни острівковогоапарату зберігалися в трьох поколіннях тварин. Трансгенні щури з експресованим геном гормону росту людини є новою біологічною моделлю, придатною для вивчення механізмів і створення методів профілактики і лікування деяких форм діабету.; The human growth hormone gene with promoter of rat tyrosine aminotranspherase or promoter of mouse metallothioneine 1 was used for producing transgenic rats. The method was developed to introduce these genes into the rat genome. The expression of the human growth hormone genes was observed in transgenic rats. The level of the human growth hormone in blood was much higher/about 80 ng/ml/ than in the control rats. One group of transgenic rats grew quicker and the other — slower as compared to the control. The tolerance to glucose decreased in the transgenic rats and the pancreatic islets experienced some degenerative changes. The transgenic rats with the human growth hormone gene can be used as a biological model of diabetes.

1990-01-01T00:00:00Z Иващенко, Т.Э. Горбунова, В.Н. Асеев, М.В. Баранов, В.С. Виноградов, С.В. Берлин, Ю.А. Гольцов, А.А. Кабоев, О.К. Шварц, Е.И. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/153073 2019-06-13T22:26:40Z 1990-01-01T00:00:00Z

Анализ рестрикционного полиморфизма ДНК-локуса D7S23 при помощи зонда КМ-19 методом цепной реакции синтеза ДНК в популяции и в семьях больных муковисцидозом Иващенко, Т.Э.; Горбунова, В.Н.; Асеев, М.В.; Баранов, В.С.; Виноградов, С.В.; Берлин, Ю.А.; Гольцов, А.А.; Кабоев, О.К.; Шварц, Е.И. Методом цепной реакции синтеза (ЦРС) ДНК проанализирован аллельный полиморфизм локуса D7S23, выявляемый ДНК-зондом КМ-19 в популяции Ленинграда — в семьях высокого риска и у больных муковисцидозом (MB). Методом полимеразной ЦРС ДНК установлено выраженное неравновесное распределение аллелей A1 и А2 зонда КМ-19 в исследованных группах. Соотношение аллелей A1 и А2 в группе доноров (46 человек) составило соответственно 75 и 25%, в семьях высокого риска (51 человек)— гетерозиготные носители гена MB—48 и 52%, тогда как у больных MB встречался исключительно аллель А2 (18 человек — все А2/А2). Полученные результаты доказывают высокодостоверное неслучайное сцепление аллеля А2 с мутантным геном MB и A1 — с его нормальным аллелем. Эти данные расширяют возможности использования молекулярных подходов для пренатальной диагностики MB на ранних сроках беременности, выявления гетерозиготного носительства данной мутации в семьях высокого риска и уточнения диагноза MB в сомнительных и генетически неясных случаях. Обсуждаются методические модификации, примененные в работе, позволяющие значительно повысить эффективность полимеразной ЦРС ДНК, уменьшить расход олнгонуклеотидных праймеров и термофильной ДНК-полимеразы.; Методом ланцюгової реакції синтезу (ЦРС) ДНК проаналізовано алельний поліморфізм локусу D7S23, що виявляється ДНК-зондом КМ-19 у популяції Ленінграда – у родинах високого ризику і хворих на муковісцидоз (MB). Методом полімеразної ЦРС ДНК встановлено виражений нерівноважний розподіл алелів A1 і А2 зонда КМ-19 у досліджених групах. Співвідношення алелів A1 і А2 у групі донорів (46 осіб) становить відповідно 75 і 25 %, у родинах високого ризику (51 чоловік) – гетерозиготні носії гена MB – 48 і 52 %, тоді як у хворих на MB зустрічається винятково алель А2 (18 осіб – усі А2/А2). Отримані результати доводять високодостовірне невипадкове зчеплення алеля А2 з мутантним геном MB і A1 – з його нормальним алелем. Ці дані розширюють можливості використання молекулярних підходів для пренатальної діагностики MB на ранніх термінах вагітності, виявлення гетерозиготного носійства даної мутації у родинах високого ризику та уточнення діагнозу MB у сумнівних і генетично неясних випадках. Обговорюються методичні модифікації, застосовані в роботі, які дозволяють значно підвищити ефективність полімеразної ЦРС ДНК, зменшити витрату олігонуклеотидних праймерів і термофільної ДНК-полімерази.; Highly significant disequilibrium of Al and A2 allelcs rate in population (group I), CF-heterozygotes (group II) and CF patients (group III) has been found with KM-19 probe in polymerase chain reaction, that constitutes 75 % and 25 % for 46 individuals in gr. I, 48 % and 52 % for 51 individuals in gr. II, 0 % and 100 % in 18 individuals of gr. Ill, respectively. These data prove highly nonrandom linkage of A2 allele of KM-19 with CF-gene and Al allele with normal gene and thus significantly extend the capacity of molecular approaches for prenatal diagnosis of CF during early development as well as for CF heterozygotes detection and CF diagnosis postnatally. Some methodological improvements in polymerase chain reaction are discussed.

1990-01-01T00:00:00Z