http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/133114 2026-04-18T23:12:41Z 2026-04-18T23:12:41Z Gamaleia, N.F. Shishko, E.D. Gluzman, D.F. Sklyarenko, L.M. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/139231 2018-06-20T00:11:19Z 2008-01-01T00:00:00Z

Sensitivity of normal and malignant human lymphocytes to 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic damage Gamaleia, N.F.; Shishko, E.D.; Gluzman, D.F.; Sklyarenko, L.M. Aim: To compare the sensitivity of normal and malignant human lymphocytes to 5-aminolevulinic acid (ALA) — mediated photodynamic damage. Methods: Blood lymphocytes isolated by Ficoll-sodium metrizoate density gradient from healthy donors (6) and hematologic patients (20) with different forms of lympholeukemia, and also transformed lymphocytes of human B-cell (Raji, Namalwa) and T-cell (MT-4, HUT-78) lines were inestigated. Diagnoses of chronic lymphoproliferative disorders were made on the grounds of morphological, cytochemical and immunocytochemical studies of peripheral blood and bone marrow cells, with immunophenotype determination by monoclonal antibodies to differentiation antigens of T, B lymphocytes and NK cells and immunocytochemical ABC-AP method. Cells of leukemic B- and T-cell lines were cultured in standard RPMI-1640 medium. For photodynamic treatment, the cells were incubated with ALA and then irradiated by a helium-neon laser (wavelength of 633 nm). The number of dead cells was determined in 20 h with trypan blue dye exclusion test. Results: The striking difference in responsiveness to ALA-mediated photodynamic treatment (ALA-PDT) between normal lymphocytes and cells isolated from lymphatic leukemia patients was established. A bulk of leukemic cells (mean for 10 patients with B-CLL — 62.06 ± 4.03%) were destroyed under the lowest ALA-PDT doses tested: 1 mM ALA, irradiation dose of 25 J/cm2. However, it was virtually impossible to attain any appreciable damage of lymphocytes from healthy donors even with the highest treatment doses (5 mM ALA, 150 J/cm2). High sensitivity to ALA-PDT of malignant lymphocytes was confirmed in experiments with human T- and B-cell leukemic cell lines, and in these experiments, an anomalous reaction to the treatment of Raji cells was also detected. The mechanisms of the difference between normal and malignant lymphocytes are discussed in terms of altered heme-synthesis processes in malignant cells. Conclusions: 1) It is shown for the first time that blood lymphocytes from lymphatic leukemia patients are highly sensitive to the damage with ALA-PDT while lymphocytes of normal donors are practically not damaged. 2) Transformed lymphocytes of human T-cell lines are more sensitive than lymphocytes of B-cell lines. 3) Lymphocytes of the Raji line display anomalous dose-effect dependence with ALA-PDT. 4) It is proposed to evaluate the drastic difference in ALA-PDT responsiveness of normal and malignant lymphocytes as a possible simple and low-traumatic test for B-CLL screening among the elderly people.; Цель: изучить чувствительность к фотодинамическому воздействию, опосредованному 5-аминолевулиновой кислотой (АЛК), нормальных и малигнизированных лимфоцитов человека. Методы: объектом исследования служили лимфоциты, выделенные с помощью градиента плотности фиколл-верографина из крови здоровых доноров (6) и гематологических больных (20) с различными формами лимфолейкозов, а также трансформированные лимфоциты В-клеточных (Raji, Namalwa) и Т-клеточных (МТ-4, HUT-78) линий человека. Диагноз хронического лимфопролиферативного заболевания ставили на основании морфологического, цитохимического и иммуноцитохимического исследования периферической крови и клеток костного мозга; иммунофенотипирование проводили с использованием панели моноклональных антител к дифференцировочным антигенам Т-, В-лимфоцитов, NK-клеток и АВС-АР-метода. Трансформированные лимфоциты клеточных линий культивировали в стандартной RPMI-1640 среде с 10% эмбриональной телячьей сывороткой. Для фотодинамического воздействия клетки инкубировали с 1,0–5,0 мМ АЛК в течение 4 ч и облучали гелий-неоновым лазером (длина волны – 633 нм), варьируя дозу от 10 до 150 Дж/см2 . Количество погибших клеток после дополнительной 20-часовой инкубации определяли с помощью теста с трипановым синим. Результаты: показано, что нормальные и малигнизированные лимфоциты человека резко отличаются по чувствительности к АЛК-опосредованному фотодинамическому действию (АЛК-ФД). Значительная часть лимфоцитов крови больных лейкозом (в среднем 62,06 ± 4,03% у 10 пациентов с В-клеточным хроническим лимфолейкозом, В-ХЛЛ) погибала при минимальных параметрах воздействия (1 мМ АЛК, доза облучения 25 Дж/см2 ), тогда как даже наивысшая доза (5 мМ АЛК, 150 Дж/см2 ) не влияла на жизнеспособность нормальных лимфоцитов. В опытах in vitro в Т-клеточных линиях отмечали больший процент гибели клеток, чем в В-клеточных. При этом линия Raji отличается парадоксальным отсутствием зависимости количества погибших клеток от дозы воздействия, что, по-видимому, связано с известным для этой линии дефектом сигнальных путей апоптоза. Обсуждаются вероятные механизмы установленных отличий между нормальными и малигнизированными лимфоцитами в контексте альтерации процессов синтеза клетками гема при малигнизации. Выводы: 1) впервые показано, что малигнизированные лимфоциты крови больных лимфолейкозом проявляют высокую чувствительность к АЛК-ФД при фактическом отсутствии такой чувствительности у лимфоцитов здоровых доноров; 2) озлокачествленные лимфоциты Т-клеточных линий более чувствительны к АЛК-ФД по сравнению с В-клеточными; 3) для клеток линии Raji установлена аномальная зависимость доза/эффект; 4) на основе полученных результатов предложен простой и малотравматичный тест для скрининга пожилых людей на наличие В-ХЛЛ.

2008-01-01T00:00:00Z Zhang, F. Sui, L. Tao Xin http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/139230 2018-06-20T00:05:35Z 2008-01-01T00:00:00Z

Correlations of BMI-1 expression and telomerase activity in ovarian cancer tissues Zhang, F.; Sui, L.; Tao Xin Aim: To investigate the correlation between oncoprotein Bmi-1 and telomerase activity in ovarian cancer tissues. Methods: SP immunohistochemistry was adopted to detect the expression of Bmi-1 protein in tissues of 47 ovarian epithelial cancer cases. Modified telomeric repeat amplification protocol (TRAP, silver staining technique) was used to detect the telomerase activity. Results: While in 80.85% (38/47) of ovarian epithelial cancer cases Bmi-1 protein was overexpressed, 46.81% (22/47) had very strong expression level. Bmi-1 expression levels in ovarian carcinoma tissue differ depending on tissue grade (higher for G3 cancer cases — 93.10% than for grade G2 cases — 61.11%) and the stage of the disease (lower for phase II and phase III cases — 66.67% than for phase IV cases — 92.31%). In ovarian epithelial cancer tissues, 87.23% (41/47) demonstrated positive telomerase activity in contrast to zero activity in normal tissues. Majority (90.24%) of specimens with positive telomerase activity possessed high Bmi-1 expression levels. Spearman correlation analysis indicated that expression of Bmi-1 protein was positively correlated with the elevated telomerase activity. Conclusions: Bmi-1 protein is highly expressed in ovarian epithelial cancer tissues, and its expression level correlates with histological grade and clinical phase of the patients. Elevation of Bmi-1 expression is closely correlated to the increased telomerase activity.; Цель: изучить корреляцию между экспрессией протеина Bmi-1 и активностью теломеразы при раке яичника. Методы: подобраны оптимальные условия для SP-иммуногистохимии для выявления экспрессии белка Bmi-1 при эпителиальном раке яичника (n = 47). Для определения активности теломеразы был использован усовершенствованый протокол амплификации теломерных повторов (TRAP, методика окрашивания серебром). Результаты: в 80,85% (38/47) случаев рака яичника была выявлена экспрессия белка Bmi-1, в 46,81% (22/47) случаев – на очень высоком уровне. Уровень экспрессии Bmi-1 зависел от степени дифференцировки опухоли (при G3 экспрессия Bmi-1 (93,10%) была выше, чем при G2 (61,11%)) и от стадии заболе- G3 экспрессия 3 экспрессия Bmi-1 (93,10%) была выше, чем при G2 (61,11%)) и от стадии заболе- Bmi-1 (93,10%) была выше, чем при G2 (61,11%)) и от стадии заболе- -1 (93,10%) была выше, чем при -1 (93,10%) была выше, чем при G2 (61,11%)) и от стадии заболе- G2 (61,11%)) и от стадии заболе- G2 (61,11%)) и от стадии заболе- 2 (61,11%)) и от стадии заболевания (уровень экпрессии ниже в стадиях II и III (66,67%), чем в стадии IV (92,31%)). В тканях эпителиального рака яичника в 87,23% (41/47) случаев выявлена положительная теломеразная активность, в отличие от нулевой активности в нормальных тканях. В большинстве исследованных случаев рака яичника (90,24%) при положительной активности теломеразы был отмечен высокий уровень экспрессии Bmi-1. Корреляционный анализ Спирмана показал, что экспрессия белка Bmi-1 положительно коррелирует с повышенной теломеразной активностью. Выводы: белок Bmi-1 экспрессирован на высоком уровне злокачествен- -1 экспрессирован на высоком уровне злокачествен- -1 экспрессирован на высоком уровне злокачественными клетками эпителиального рака яичника, и экспрессия этого белка коррелирует с гистологической градацией и клинической стадией рака. Увеличение экспрессии Bmi-1 коррелировало с повышенной теломеразной активностью.

2008-01-01T00:00:00Z Berezhnaya, N.M. Vinnichuk, Yu.D. Belova, O.B. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/139229 2018-06-20T00:12:13Z 2008-01-01T00:00:00Z

The use of doxorubicine at low doses for elevation of LAK-activity toward explants and cells of MC-rhabdomyosarcoma and В16 melanoma resistant to doxorubicin Berezhnaya, N.M.; Vinnichuk, Yu.D.; Belova, O.B. Aim: To study the influence of doxorubicin at low doses on antitumor action of activated (LAK) and non-activated lymphocytes from lymph nodes toward tumor cells of mice bearing doxorubicin-resistant and doxorubicin-sensitive transplantable MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma. Materials and Methods: The study was carried out on BALB/c mice bearing MC-rhabdomyosarcoma and С57BL/6 mice bearing В16 melanoma. Explants, tumor cells and lymphocytes were cultivated in diffusion chambers, filters were stained with hematoxylin by Karachi, and morphology of preparations was examined. Results: At the day 7 of tumor growth in mice bearing resistant MC-rhabdomyosarcoma, non-activated lymphocytes pretreated with low-dose doxorubicin possess the highest antitumor activity, and in mice bearing doxorubicin-resistant B16 melanoma the highest antitumor activity was detected for lymphocytes after combined cultivation with IL-2 and doxorubicin. At the day 14 of tumor growth, LAK obtained from lymphocytes pretreated with doxorubicin possess the highest cytotoxic activity toward resistant tumor cells both of MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma. There was no such effect in the case of sensitive tumors. Conclusion: To elevate antitumor activity of LAK toward MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma cells, low doses of doxorubicin could be used at certain conditions of LAK generation.; Цель: изучить влияние малых доз доксорубицина на противоопухолевое действие активированных (ЛАК) и неактивированных лимфоцитов лимфатических узлов по отношению к опухолевым клеткам мышей с резистентными и чувствительными к доксорубицину перевивной МХ-рабдомиосаркомой и меланомой В16. Материалы и методы: исследования проведены на мышах линии BALB/c с МХ-рабдомиосаркомой и С57BL/6 c меланомой В16. Эксплантаты, опухолевые клетки и лимфоциты культивировали в диффузионных камерах и окраской фильтров гематоксилином по Караччи. Исследовали морфологическую картину полученных препаратов с учетом критериев роста опухоли. Результаты: сопоставление результатов противоопухолевой активности активированных и неактивированных лимфоцитов, полученных в различных условиях, показало следующее. На 7-е сутки у мышей з резистентной МХ-рабдомиосаркомой наибольшей противоопухолевой активностью обладали неактивированные лимфоциты, предварительно обработанные малыми дозами докорубицина, а у мышей з резистентной меланомой В16 — лимфоциты после сочетанного культивирования с ИЛ-2 и доксорубицином. На 14-е сутки роста опухоли наибольшей цитотоксической активностью обладали ЛАК, полученные из лимфоцитов, предварительно обработанных доксорубицином, в отношении резистентных опухолевых клеток как перевивной МХ-рабдомиосаркомы, так и меланомы В16. Относительно чувствительных клеток указанных опухолей такой эффект не отмечался. Выводы: для усиления противоопухолевой активности ЛАК по отношению к клеткам МХ-рабдомиосаркомы и меланомы В16, резистентных к доксорубицину, могут быть использованы малые дозы доксорубицина при соблюдении определенных условий получения ЛАК.

2008-01-01T00:00:00Z Mei, J. Gao, Y. Zhang, L. Cai, X. Qian, Z. Huang, H. Huang, W. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/139228 2018-06-20T00:11:16Z 2008-01-01T00:00:00Z

VEGF-siRNA silencing induces apoptosis, inhibits proliferation and suppresses vasculogenic mimicry in osteosarcoma in vitro Mei, J.; Gao, Y.; Zhang, L.; Cai, X.; Qian, Z.; Huang, H.; Huang, W. Aim: To inhibit the gene expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) with the RNA interference (RNAi) technique and explore its influence on the apoptosis, proliferation, vasculogenic mimicry of osteosarcoma in vitro. Methods: PSilencer-VEGF plasmid transfected into osteosarcoma cell line of MG63 was recombinated by gene cloning, and VEGF expression was examined by Western blotting after transfection. The biological features of transfected MG63 including proliferation, apoptosis and vasculogenic mimicry, were assessed by MTT assay, flowcytometer, annexin V-FITC/PI, light microscopy and HE staining. Results: The sequence of pSilencer-VEGF plasmid was confirmed by DNA sequencing. Sequence-specific siRNA targeting VEGF significantly decreases its expression in MG63 cells. Cell growth was inhibited and early apoptosis was induced compared with non-siRNA tansfected cells. Decreased VEGF expression was associated with reduced vasculogenic mimicry of MG63 cells. Conclusions: VEGF gene might be closely related to the apoptosis and proliferation of osteosarcoma cells, and appears to be crucial for formation of vasculogenic mimicry in osteosarcoma. Inhibition of VEGF expression by sequence-specific siRNA may become a novel approach for the treatment of VEGF-enriched neoplasma such as osteosarcoma.; Цель: ингибировать експрессию фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) с помощью метода РНК интерференции (RNAi) и изучить влияние введения сайленсинга siRNA-VEGF на апоптоз, пролиферацию, васкулярную мимикрию клеток остеосаркомы in vitro. Методы: плазмида PSilencer-VEGF, рекомбинированная за счет клонирования специфической siRNA последовательности, была трансфецирована в клеточную линию остеосаркомы MG63. Экспрессию VEGF после трансфекции проверяли с помощью Вестерн-блот анализа. Биологические особенности трансфецированных клеток MG63, а именно пролиферацию, апоптоз и васкулярную мимикрию, изучали с помощью MTТ-анализа, проточной цитофлуориметрии, аннексина V-FITC/пропидиум йодида, световой микроскопии и окрашивания гематоксилином и эозином (HE). Результаты: последовательность, клонированная в плазмиду pSilencer-VEGF, проверена при секвенировании ДНК. Специфические к VEGF последовательности siRNA значительно снижали его экспрессию клетками MG63. В сравнении с клетками, трансфeцированными плазмидой без siRNA, рост клеток с PSilencer-VEGF был ингибирован, а также в них был индуцирован ранний апоптоз. Ингибирование экспрессии VEGF было ассоциировано со снижением васкулярной мимикрии клеток MG63. Выводы: ген VEGF может быть тесно связан с регуляцией апоптоза и пролиферации клеток остеосаркомы и может быть ключевым регулятором васкулярной мимикрии. Ингибирование экспрессии VEGF с помощью специфических siRNA можно рассматривать как новый подход к лечению опухолей, характеризующихся повышенной экспрессией VEGF, таких как остеосаркома.

2008-01-01T00:00:00Z