http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/133103 2026-04-06T15:12:45Z 2026-04-06T15:12:45Z Ritter, U. Scharff, P. Prylutska, S.V. Matyshevska, O.P. Burlaka, A.P. Golub, A.А. Potebnya br, G.P. Prylutskyy, Y.I. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/138177 2018-06-19T00:02:57Z 2006-01-01T00:00:00Z

Effect of the visible light irradiation of fullerene containing composites on the ros generation and the viability of tumor cells Ritter, U.; Scharff, P.; Prylutska, S.V.; Matyshevska, O.P.; Burlaka, A.P.; Golub, A.А.; Potebnya br, G.P.; Prylutskyy, Y.I. Aim: To study the effect of fullerene-containing composites, irradiated by visible light, on the radical oxygen species (ROS) generation in thymocytes, ascitic cells from Erlich’s tumor and leukemia cells L1210; to investigate viability of these cells in the presence of fullerene-containing composites under irradiation conditions. Materials and Methods: The viability of cells was evaluated by staining with 0.4% solution of the trypan blue; ROS were detected with the use of electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy and spin traps; solutions of fullerene-containing composites were irradiated with mercury-vapor lamp. Results: We demonstrated that under irradiation conditions fullerene-containing composites increase the rate of ROS generation and decrease the number of viable tumor cells. Conclusions: The obtained data allow to consider the fullerene-containing composites as potential agents for photodynamic therapy.; Цель: изучить влияние фуллеренсодержащих композитов, облученных видимым светом, на генерирование радикальных форм кислорода (РФК) в клетках тимоцитов, асцитного рака Эрлиха и лейкоза L1210. Исследовать жизнеспособность этих клеток в присутствии облученных фуллеренсодержащих композитов. Методы: жизнеспособность клеток определяли с использованием 0,4 % раствора трипанового синего; РФК регистрировали методом ЭПР- спектроскопии и спиновых ловушек; облучение водных раcтворов фуллеренсодержащих композитов в видимом диапазоне осуществляли с помощью ртутной лампы. Результаты: показано, что фуллеренсодержащие композиты при облучении повышают скорость генерирования РФК и уменьшают количество жизнеспособных опухолевых клеток. Выводы: полученные результаты позволяют рассматривать фуллеренсодержащие композиты как потенциальные препараты для фотодинамической терапии.

2006-01-01T00:00:00Z Khalikova, T.A. Korolenko, T.A. Zhanaeva, S.Ya. Kaledin, V.I. Kogan, G. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/137933 2018-06-18T00:06:46Z 2006-01-01T00:00:00Z

Enhancing effect of new biological response modifier sulfoethylated (1→3)-β-D-glucan on antitumor activity of cyclophosphamide in the treatment Khalikova, T.A.; Korolenko, T.A.; Zhanaeva, S.Ya.; Kaledin, V.I.; Kogan, G. Aim: One of the advanced methodologies of the tumor therapy is the application of the so-called biological response modifiers used for activation of the endogenous antitumor mechanisms and combined with classical cytotoxic agents. The aim of this work was the investigation of the effect of sulfoethylated (1→3)-β-D-glucan (SEG) in the treatment of experimental murine leukoses in combination with cyclophosphamide (CPA) and its ability to modulate the activity of lysosomal enzymes in tumor tissues. Materials and Methods: The solid forms of inoculated murine leukoses P388 and L1210/1 were transplantated to male DBA/2 mice. The therapy was performed by treating animals with CPA (Biokhimik, Saransk, Russia) alone or in combination with SEG (Institute of Chemistry, Slovak Academy of Sciences, Slovakia). CPA was administered in saline as a single intraperitoneal (ip) injection on the 10th day after tumor transplantation; SEG was administered to mice ip 3 days after tumor transplantation with the intervals in 3 days. The therapy effect was estimated by measuring of solid tumor volume. Activity of the cysteine proteases — cathepsins B and L — was measured fluorometrically using fluorescent substrates Z-Arg-Arg-MCA and Z-Phe-Arg-MCA (Sigma, USA), respectively. The apoptosis was estimated evaluating the number of cells with fragmented nuclei using optical microscope. Results: It has been demonstrated that application SEG leads to inhibition of tumor growth and potentiates therapeutic action of CPA, especially at repeated administrations during the whole treatment/observation At addition of SEG, therapeutic effect of a one-half reduced dose of CPA is equal or higher than that of the full dose. Therapeutic action of CPA and SEG on the studied tumors is realized predominantly through induction of apoptosis and is accompanied by a substantial increase of the activity of cysteine proteases cathepsins B and L in tumor tissues. The highest cathepsin B and cathepsin L activity in tumor tissue accompanied with the strongest inhibition of tumor growth. It is suggested that this phenomenon is due to the infiltration of the macrophages rich in the named enzymes into the tumor, where they phagocytize the apoptotic cells and tissue debris. Conclusion: Utilization of this polysaccharide BRM, sulfoethylated (1→3)-β-D-glucan, might potentially enhance efficiency of antitumor therapy with standard cytostatics without a need of substantial increase of their dosage and hence avoiding their toxic side-effects.; Цель: одним из перспективных методов противоопухолевой терапии является использование так называемых модификаторов биологического ответа, применяемых для активации эндогенных противоопухолевых механизмов и комбинируемых с классическими цитотоксическими препаратами. Цель данной работы — исследование эффекта сульфоэтилированного (1→ 3)-β-D-гликана (SEG) при лечении экспериментальных лейкозов мышей в комбинации с циклофосфаном (СРА) и его способность модулировать активность лизосомных ферментов в опухолевой ткани. Материалы и методы: солидные формы перевиваемых лейкозов мышей Р388 и L1210/1 трансплантировали мышам-самцам DBA/2. Для лечения использовали СРА (Биохимик, Саранск, Россия) и его комбинацию с SEG (Институт химии Словацкой Академии Наук, Братислава, Словакия). СРА вводили внутрибрюшинно на 10 сут после перевивки опухолей; SEG вводили внутрибрюшинно начиная с 3 сут после трансплантации лейкозов с интервалом в 3 дня. Терапевтический эффект оценивали путем измерения объема солидной опухоли. Активность цистеиновых протеаз — катепсинов В и L — определяли флюориметрическим методом, используя флюоресцентные субстраты Z-Arg-Arg-MCA и Z-Phe-Arg-MCA (Sigma, США). Апоптоз оценивали по результатам подсчета клеток с фрагментированными ядрами в световом микроскопе. Результаты: в работе показано, что использование SEG приводит к торможению опухолевого роста и потенцирует терапевтический эффект СРА, особенно при повторном введении в течение всего лечения. В сочетании с SEG терапевтический эффект половинной дозы СРА равнозначен или превышает действие полной дозы цитостатика. Воздействие СРА и SEG на использованные в исследовании опухоли реализуется в основном через индукцию апоптоза и сопровождается существенным повышением активности цистеиновых протеаз катепсинов В и L в опухолевой ткани. Наиболее высокая активность катепсинов В и L сопровождается максимальным подавлением опухолевого роста. Предположительно это обусловлено инфильтрацией опухолевой ткани макрофагами с высоким содержанием вышеназванных ферментов, где они фагоцитируют клетки в апоптозе. Выводы: использование сульфоэтилированного (1→3)-β-D-гликана, нового модификатора биологического ответа дает возможность существенно повысить эффективность противоопухолевой терапии стандартными цитостатиками без повышения их дозы, что позволяет избежать побочных эффектов данных препаратов.

2006-01-01T00:00:00Z Burlaka, A.P. Sidorik, E.P. Ganusevich, I.I. Lestchenko, Yu.M. Burlaka, A.А. Osinsky, S.P. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/137932 2018-06-18T00:10:57Z 2006-01-01T00:00:00Z

High formation of superoxide anion and nitric oxide, and matrix metalloproteinases activity in vascular wall of rectal carcinoma vessels Burlaka, A.P.; Sidorik, E.P.; Ganusevich, I.I.; Lestchenko, Yu.M.; Burlaka, A.А.; Osinsky, S.P. Aim: To study the relationship between the level of generation of reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) and activity of matrix metalloproteinases (MMPs) MMP-2 and MMP-9 in the vessels isolated from rectal tumors and Arteria rectalis superior. Methods: EPR at the room temperature and 77 °K, Spin Traps technology and zymography in polyacrylamide gels were applied. Results: In the vessels isolated from rectal tumors and Arteria rectalis superior high levels of ROS, NO· and formation of complexes of NO· with FeS-proteins at the sites of electron-transporting chain of mitochondria have been detected. High activities of MMP-2 and MMP-9 in vascular wall were also observed. The direct positive correlation between the rate of NO· generation and formation of complexes of NO·· with FeS-proteins as well as between ROS and NO formation and MMPs activities have been revealed. Conclusion: Altered oxidative equilibrium in mitochondria of cells in vascular wall promotes formation of cell hypoxia and its autocatalytic potentiation accompanied with activation of MMPs.; Цель: изучить взаимоотношение между уровнями образования активных форм кислорода (АФК) и оксида азота (ОА) и активности матриксных металлопротеиназ (MMPs) MMP-2 и MMP-9 в сосудах, изолированных из опухолевой ткани прямой кишки, и в Arteria rectalis superior. Методы: ЭПР при комнатной температуре и при 77 °K, технология спиновых ловушек, зимофрафия в полиакриламидном геле. Результаты: в сосудах, изолированных из опухолевой ткани прямой кишки, и в Arteria rectalis superior обнаружены высокие уровни образования АФК, · и комплексов · с FeS-белками в участках цепи митохондрий. Определена также высокая активность MMP-2 и MMP-9 в стенке сосудов, находящихся в опухолевом узле. Обнаружена прямая положительная корреляция между величиной образования · и образованием комплексов · с белками, а также между образованием АФК и NO и активность MMPs. Выводы: измененное окислительное равновесие в митохондриях клеток стенки сосудов, находящихся в опухолевой ткани, усиливает формирование в них клеточной гипоксии, ее аутокаталитическое потенцирование, что сопровождается активацией в этих клетках MMPs

2006-01-01T00:00:00Z Mayevska, O. Shuvayeva, H. Igumentseva, N. Havrylov, S. Basaraba, O. Bobak, Y. Barska, M. Volod’ko, N. Baranska, J. Buchman, V. Drobot, L. http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/137931 2018-06-18T00:10:42Z 2006-01-01T00:00:00Z

Expression of adaptor protein Ruk/CIN85 isoforms in cell lines of various tissue origins and human melanoma Mayevska, O.; Shuvayeva, H.; Igumentseva, N.; Havrylov, S.; Basaraba, O.; Bobak, Y.; Barska, M.; Volod’ko, N.; Baranska, J.; Buchman, V.; Drobot, L. Aim: Development of monoclonal and polyclonal antibodies against recombinant GST-fused proteins including correspondingly N- and C-terminal parts of Ruk/CIN85 adaptor protein. Analysis of Ruk/CIN85 expression patterns in cell lines of various tissue origins and human melanoma. Methods: Recombinant GST-fused fragments of Ruk/CIN85 were expressed in bacterial system and affinity purified. Monoclonal antibodies against SH3A domain of Ruk/CIN85 were produced using hybridoma technique. The specificity of generated antibodies was examined by ELISA. Polyclonal antibodies against C-terminal coiled-coil region of Ruk/CIN85 were affinity purified from serum of immunized rabbit. Expression patterns of Ruk/CIN85 isoforms and their subcellular localization in cell lines of various tissue origins and human melanoma samples were analyzed by immunoblotting, immunoprecipitation and immunofluorescence microcopy. Results: Ruk/CIN85 is ubiquitously expressed SH3-containing adaptor/scaffold protein which plays important roles in signalling processes. N-terminal half of Ruk/CIN85 molecule, including three SH3 domains, and its C-terminal coiled-coil region were used as antigens to produce monoclonal and polyclonal antibodies, respectively. Hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (mAbs) to SH3 fragment of Ruk/CIN85 were established. One of the mAbs was extensively characterized and designated as MISh-A1. It was shown that this mAb recognizes an epitope, which resides within first SH3A domain. Polyclonal anti-Ruks Abs affinity purified from serum of immunized rabbit specifically recognized main Ruk/CIN85 isoforms, both endogenous and recombinant, in lysates of HEK293 cells. Notably, produced Abs did not cross-react with CD2AP, the member of the same family of adaptor/scaffold proteins. Multiple molecular forms of Ruk/CIN85 with apparent molecular weights of 130, 80–85, 70–75, 50–56, 34–40 and 29 kD were detected in cell lyzates of NIH3T3, Cos1, L1210, HEK293, Ramos, HeLa S3, MDCK, C6, A549 and U937 using anti-Ruk antibodies. Oligomerization between p85 and p50–56 forms of Ruk/CIN85 was revealed in C6 and NIH3T3 cells, but not in HeLa S3 and HEK293 cells by immunoprecipitation using MISh-A1 antibody following anti-Ruk Western-blot analysis. Using immunofluorescent microscopy and anti-Ruk antibodies, endogenous Ruk-variates were found mostly in cytoplasm of C6, NIH3T3, HEK293 cells and at lower level — in nuclei. Conclusion: Patterns of Ruk/CIN85 molecular forms expression are cell-specific and determined by cellular context. Assembly of oligomeric complexes between p85 and p50–56 Ruk/CIN85 isoforms in C6 and NIH3T3 cells but not in HeLa S3 and HEK293 cells may reflect their specific biological roles in different cell lines. High level of full-length Rukl/CIN85 form expression was revealed in extracts of human melanoma samples. Abs described in this paper may prove useful in future studies of Ruk/CIN85 expression and function in normal and transformed cells.; Цель: получение моноклональных и поликлональных антител против рекомбинантных GST-коныогированных форм белков, включающих соответственно N-концевую и С-концевую части адаптерного белка Ruk/CIN85. Авалю профилей экспрессии изоформ Ruk/CIN85 и юс субклеточной локализации в клеточных линиях различного тканевого проасхождешя н образцах меланомы человека. Методы: рекомбинантные GST-конъюгнрованные фрагменты Ruk/CIN85 (GST-3SH3/CIN85 и GST- Ruk ) экспрессировали в бактериальной системе с последующей аффинной очисткой на глутатнон-сефарозе. Для получения моноклональных антител против 3SH3 фрагмента С IN85 использовали гнбридомную технологию. Поликлоналыеле антитела против С-конневого суперсинралнзоваииого района Ruk очищали из сыворотки иммунизированного кролика аффинной хроматографией на Ruk -сефарозе. Профази экспрессии изоформ Ruk/CTN85, их олигомеризацию и субклеточную локализацию изучали метолами Вестерн-блотанализа, нммувопрецнпнгацнн и иммунофлуоресиентной микроскопии. Результаты: Ruk/CIN85, S НЗ-содержащий адаптерный “стеллажный” белок, преет важную роль в сшив мытых процессах клеток. N- конневую часть молекулы CIN85, включающую 3 SH3 домена, н С-конценой суперспирализокаиный райе» использовали в качестве антигенов для получения моноклональных и нолик.тональных антител, соответственно. Получены гибрнломы. секретнру юнше моноклональные антитела к 3SH3-фрагменту. Показано, что одно из этих антител (MISh-Al) специфически узнает эпитоп, находящийся в первом $НЗАдомеие адаптерного белка. Поликлональные анти-Ruk антитела, аффинно очищенные из сыворотки иммунизированного кроля, снецифическм узнавати основные изоформы Ruk/CIN85, как эндогенные, так и рекомбинантные, в лизатах клеток НЕК293. Важно, что полученные антитела не реагировази перекрестно с CD2AP, представителем этого же семейства атаптерных белков. Множественные молекулярные формы Ruk/CIN85 с кажущейся молекулярной массой 130. 80-85, 70-75, 50-56, 34-40 and 29 кДа были детектированы в лизатах клеток NIH3T3, Cost, 1.1210, НЕК293, Ramos, HeLa S3, MDCK, Сб, A549 и U937 с Rak антител. Олигомеризацию между р85 и р50-56 формами Ruk/CIN85 выявили в клетках С6 и NIH3T3, во не в HeLa S3 и НЕК293, с помощью антитела MISh-AI и последующего анги-Rak Вестерн-блот анализа. Иммунофлу оресиентной микроскопией с использованием анти-Ruk антител эндогенные варианты Ruk выявляли прешущественно в цитоплазме клеток С6, NIH ЗТЗ, НЕК293 и в более низкой степени в ядре. Высокий уровень экспресс» полноразмерной формы RA/C1N85 выявлен в образцах меланомы человека. Выводы: профили экспрессии множественных эндогенных вариантов Ruk/CIN85 и способность к формированию олигомерных комніексов между различными и зоформами являются характерными для каждой исследованной линии клеток. Не исключено, что выявленные особенности могут определять специфическую биологическую значимость изоформ Ruk/CEN85 в различных типах клеток в зависимости от клеточного контекста. Следствием высокого уровня экспрессии полноразмерной формы Rnk/CIN85 в образцах меланомы человека может быть нарушение согласованного контроля процессов пролиферации и апоптоза в трансформированных ме.таноцитах. Антитела, описанные в этой работе, могут быть использованы для изучения экспрессии и функций Ruk/CIN85 в опухолях человека.

2006-01-01T00:00:00Z