Фракционирование ДНК эукариот в пульсирующем электрическом поле. Особенности поведения ДНК-топоизомеразного комплекса в препаратах изолированных ядер

Abstract

зучены свойства ДНК-топоизомеразного комплекса в препаратах изолированных ядер. Показано, что комплекс ядерная ДНК – топоизомераза II функционирует однотипно как в Mg2²⁺-, так и в Са2²⁺-содержащей среде. В отличие от комплекса в условиях in vitro, ядерный ДНК-топоизомеразный комплекс, обработанный ЭДТА, способствует не лигированию, а возрастанию расщепления ядерной ДНК. Зависимое от ЭДТА усиленное расщепление ДНК наблюдается в случае, если ядра, инкубируемые в Mg²⁺(Ca²⁺)- содержащей среде, были обработаны ЭДТА или при инкубации MgЭ(CaЭ)-ядep в при сутствии ионов Mg²⁺ . Показано, что ядерный комплекс, обработанный DS-Na, приобретает свойство DS-Nа-независимо расщеплять ядерную ДНК. Особенности поведения комплекса топоизомераза II – ядерная ДНК могут быть связаны с участием фермента в поддержании высших уровней структурной оранизации хроматина, что приводит к модификации комплекса в условиях in vivo. Высказано предположение о наличии в клетках различных вариантов ДНК-топоизомеразного комплекса, имеющих физиологическое значение.

Досліджено властивості ДНК-топоізомеразного комплексу в препаратах ізольованих ядер. Показано, що комплекс ядерна ДНК – топоізомераза II функціонує однаково як у середовищі з Mg²⁺, так і з Ca²⁺. На відміну від комплексу за умов in vitro, ядерний ДНК-топоізомеразний комплекс, оброблений ЕДТА, сприяє не лігуванню, а підсиленню розщеплення ядерної ДНК. Залежне від ЕДТА посилене розщеплення ДНК спостерігається, коли ядра, інкубовані у середовищі з Mg²⁺ (Ca ²⁺ ) , були оброблені ЕДТА або за інкубації MgE (CaE)ядер у присутності іонів Mg²⁺. Показано, що ядерний комплекс, оброблений Ds-Na, набуває властивості Ds-Na-незалежного розщеплення ядерної ДНК. Особливості поведінки комплексу топоізомераза II – ядерна ДНК можуть бути пов'язані з участю фермента у підтримці вищих рівнів структурової організації хроматину, що призводить до модифікації комплексу за умов in vivo. Зроблено припущення про наявність в клітинах різних варіантів ДНК-топоізомеразного комплексу, що може мати фізіологічне значення.

The properties of topoisomerase II/DNA complex in nuclear preparations have been investigated. It has been shown that topoII/nuclear DNA complex functiones unitypically both in Mg ²⁺ and in Ca ²⁺-containing media. Unlike to the in vitro assay the treatment of topoII/nuclear DNA complex with EDTA resulted in increase of nuclear DNA cleavage rather than its rejoining. The nuclear topoII/DNA complex treated with SDS was found to acquire the capacity to subsequent SDS-independent nuclear DNA cleavage. The salient features of topoisomerase II/nuclear DNA complex are supposed to be due to the topoII enzyme involvement in higher level's chromatin compactization leading to the initial stabilization of topoII/nuclear DNA complex in vivo conditions. The availability in cells the different topoII/DNA complex variants of possible physiological value has been proposed. Full text: (PDF, in Russian)